靶向Hiwi基因的siRNA干擾對(duì)誘導(dǎo)三陰乳腺癌MDa-MB-231細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、[目的]
　　1.通過靶向RNA干擾實(shí)驗(yàn)確定在三陰乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中干擾較理想的siRNA，然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定進(jìn)行細(xì)胞流式檢測(cè)的siRNA。
　　2.通過篩選出來的siRNA靶向和hiwi基因干擾，了解干擾hiwi對(duì)三陰乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231凋亡的影響，來探討hiwi的RNA干擾對(duì)三陰乳腺癌治療的意義。
　　[方法]
　　培養(yǎng)并轉(zhuǎn)染（按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分為六組:hiwi10330組、hiwi10

2、085組、hiwi10328組、NC組、GAPDH組和Blank組）三陰乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，在6孔板中細(xì)胞密度在1.5×105～4×105時(shí)作為細(xì)胞轉(zhuǎn)染的最佳時(shí)機(jī)，轉(zhuǎn)染后應(yīng)用qRT-PCR、Western-Blot分析hiwi基因的mRNA及其靶蛋白的表達(dá)情況，根據(jù)結(jié)果評(píng)估干擾效果篩選有效的siRNA干擾片段;根據(jù)PCR和Western-blot的結(jié)果選擇hiwi10330組作為干擾組（按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)分為三組:干擾組，陰性對(duì)照

3、組/NC、空白對(duì)照組/Blank），同樣在6孔板中細(xì)胞密度在1.5×105～4×105時(shí)作為細(xì)胞轉(zhuǎn)染的最佳時(shí)機(jī)。在細(xì)胞轉(zhuǎn)染24小時(shí)后進(jìn)行細(xì)胞流式檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率。
　　[結(jié)果]
　　1.靶向hiwi基因的siRNA干擾后，hiwi10330組中的mRNA的表達(dá)量明顯降低(P＜0.05)，Hiwi基因的靶蛋白的表達(dá)也出現(xiàn)了明顯的抑制(P＜0.05)。
　　2.靶向hiwi基因的siRNA干擾后，hiwi10330組