三氧化二砷對人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231作用的初步研究.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率逐年增高，且日趨年輕化，嚴(yán)重危害著女性身心健康。其中約有1/3乳腺癌患者雌激素受體表達(dá)陰性，與表達(dá)陽性者相比，此類乳腺癌惡性程度高，預(yù)后差，盡管以手術(shù)、放療、化療為主的綜合治療已極大地提高了該類患者的生存率，但仍有較高的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移率。三氧化二砷(arsenic trioxide，ATO，As2O3)俗稱砒霜，20世紀(jì)70年代被用于治療急性早幼粒白血病(acute promyelocytic leuke

2、mia，APL)，療效顯著且無嚴(yán)重毒副作用，之后備受關(guān)注，成為醫(yī)學(xué)界研究焦點(diǎn)。越來越多的研究顯示，除血液腫瘤細(xì)胞外，As2O3對多種實(shí)體瘤細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡和/或抑制生長的作用。但是As2O3應(yīng)用于乳腺癌中的研究相對較少。本實(shí)驗(yàn)以雌激素受體陰性人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231為研究對象，觀察三氧化二砷對該細(xì)胞增殖、細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白的影響情況，探討其可能的作用機(jī)制，為其將來可能應(yīng)用乳腺癌臨床治療提供理論依據(jù)，以便能為該患者群

3、開辟新的治療途徑。
　　 目的
　　 觀察不同濃度As2O3對人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡的影響，探討其誘導(dǎo)凋亡的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 將不同濃度的As2O3與MDA-MB-231細(xì)胞共同培養(yǎng)不同時間后，用MTT法檢測As2O3對MDA-MB-231細(xì)胞的生長抑制作用；相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)：應(yīng)用原位缺口末端標(biāo)記(TdT-mediated dUTP nick and l

4、abeling，TUNEL)檢測細(xì)胞凋亡；免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測細(xì)胞內(nèi)survivin和caspase-3蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.不同濃度的As2O3均能體外抑制MDA-MB-231細(xì)胞生長，且存在劑量、時間-效應(yīng)關(guān)系，其24 h IC50為43.13μM，48 h IC50為5.64μM，72 h IC50為1.96μM。
　　 2.相差顯微鏡下可見被As2O3作用24h后的MDA-MB-231

5、細(xì)胞隨作用濃度增加形態(tài)逐漸改變。對照組細(xì)胞貼壁良好，梭形或橢圓形，胞質(zhì)均勻，細(xì)胞間緊密連接成片；實(shí)驗(yàn)組隨As2O3作用濃度的增加，貼壁細(xì)胞逐漸減少，胞質(zhì)內(nèi)顆粒物質(zhì)增多，細(xì)胞變圓，間隙增大。
　　 3.TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡，光鏡下觀察顯示，對照組和經(jīng)各濃度As2O3作用24h后的實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞核均出現(xiàn)陽性染色，對照組僅個別細(xì)胞出現(xiàn)陽性染色；各組的陽性染色區(qū)平均灰度值存在差別(P<0.05)，陽性染色區(qū)平均灰度值隨著作用濃度的增加

6、而增高。
　　 4.三氧化二砷作用于MDA-MB-231細(xì)胞24h后，免疫細(xì)胞化學(xué)染色顯示，隨著藥物濃度增加，Survivin蛋白表達(dá)減少而Caspase-3蛋白表達(dá)增加(P<0.05)，且兩者呈負(fù)相關(guān)(P<0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 1.As2O3對體外培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞增殖有抑制作用，并存在劑量、時間-效應(yīng)關(guān)系。
　　 2.As2O3在體外可以誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞凋亡，凋亡