沉默乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞MTDH基因?qū)β闶笠浦擦鲈鲋侈D(zhuǎn)移的抑制作用.pdf

1、目的：探討乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞MTDH基因沉默對裸鼠移植瘤增殖轉(zhuǎn)移的抑制作用及其機(jī)制。
　　方法：選擇 SPF級雌性裸小鼠為實驗動物，腫瘤造模所用的細(xì)胞株有乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株，MTDH基因沉默了的MDA-MB-231/P細(xì)胞株，空載體轉(zhuǎn)染的MDA-MB-231/P0細(xì)胞株。把15只裸鼠隨機(jī)分為腫瘤組（乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株）、實驗組（MDA-MB-231/P細(xì)胞株）和對照組(MDA-MB-231/

2、P0細(xì)胞株)三組。分別把三種不同細(xì)胞株注射到裸鼠右側(cè)胸壁第二對乳腺下。第三周開始每三天測瘤體的長短徑，了解瘤體體積變化。第八周處死裸鼠，切取腫瘤稱重。取裸鼠體表腫瘤、腋窩淋巴結(jié)和肺部組織行病理學(xué)檢查。RT-PCR檢測裸鼠體表瘤體中MTDH mRNA的表達(dá)，Weston-blot檢測瘤體細(xì)胞MTDH蛋白的表達(dá)，免疫組織化學(xué)檢測裸鼠腫瘤中MTDH蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.在相同的飼養(yǎng)條件下，實驗組裸鼠與腫瘤組和對照組相比較

3、，同時間點的實驗組腫瘤體積明顯較小，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），而腫瘤組與對照組相比無顯著性差異（P>0.05）。從各組裸鼠腫瘤生長曲線可以看出實驗組腫瘤明顯比另外兩組生長緩慢，而腫瘤組和對照組在腫瘤生長速度上無明顯差別。
　　2.腫瘤重量：實驗組與腫瘤組和對照組相比較，第八周處死裸鼠時實驗組腫瘤重量明顯減輕，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），而腫瘤組與對照組相比無顯著性差異（P>0.05）。
　　3.體表腫瘤的病理結(jié)

4、果顯示，三組之間腫瘤細(xì)胞排列和生長方式以及腫瘤血管生長沒有明顯差別。
　　4.腋窩淋巴結(jié)：HE染色后鏡檢，腫瘤組內(nèi)5組腋窩淋巴結(jié)標(biāo)本，18個淋巴結(jié)標(biāo)本中10個轉(zhuǎn)移，對照組16個淋巴結(jié)標(biāo)本中8個轉(zhuǎn)移，實驗組18個淋巴結(jié)中2個轉(zhuǎn)移。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為：56％、50％和11％，實驗組轉(zhuǎn)移率明顯低于腫瘤組和對照組（P<0.01），而對照組與腫瘤組陽性率比較無差別（P>0.05）。
　　5.肺部組織HE染色后，腫瘤組內(nèi)的5個肺標(biāo)本

5、中轉(zhuǎn)移陽性的有1個，對照組2個為陽性，實驗組標(biāo)本轉(zhuǎn)移陽性的有0個。
　　6.應(yīng)用RT-PCR分析了接種的三組裸鼠體表瘤體組織的MTDH mRNA的表達(dá)。與腫瘤組和對照組相比，實驗組瘤體組織的MTDH mRNA表達(dá)水平下降，差異有顯著意義（P<0.01），腫瘤組與對照組相比差異無顯著性（P>0.05）。
　　7.Western blot法檢測三組裸鼠瘤體組織中的MTDH蛋白表達(dá)量，與腫瘤組和對照組相比，實驗組瘤體組織中的MTD

6、H蛋白表達(dá)水平明顯下降（P<0.01），腫瘤組與對照組MTDH蛋白表達(dá)水平相比無顯著差異（P>0.05）。
　　8.體表腫瘤的免疫組化：結(jié)果按照評分標(biāo)準(zhǔn)評價，腫瘤組內(nèi)的5個標(biāo)本的25個視野有18個為陽性，對照組有17個，實驗組有4個為陽性，其平均陽性率分別為：72％、68％和16％。與腫瘤組和對照組比較，實驗組MTDH蛋白表達(dá)陽性率明顯降低（P<0.01），而對照組與腫瘤組MTDH蛋白表達(dá)陽性率無差別（P>0.05）。