rh-EPO對(duì)人MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)外生長(zhǎng)的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究rh-EPO對(duì)人MDA-MB-231乳腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)外生長(zhǎng)的影響并探討其在調(diào)控腫瘤生長(zhǎng)、血管生成和細(xì)胞凋亡中作用及機(jī)制。
　　方法:
　　1、選用適當(dāng)濃度的p38MAPK抑制劑SB203580、ERK抑制劑U0126、JNK抑制劑SP600125、NF-κB抑制劑PDTC預(yù)處理乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞,用MTT法檢測(cè)經(jīng)不同濃度的rh-EPO誘導(dǎo)后細(xì)胞的增殖情況。
　　2、MDA-MB-231細(xì)胞經(jīng)不

2、同濃度rh-EPO處理后,用ELISA法檢測(cè)炎性介質(zhì)TNF-α、PGE-2的水平變化。
　　3、將MDA-MB-231細(xì)胞接種于裸鼠皮下建立荷瘤模型。2周后,將裸鼠隨機(jī)分成4組,每組6只,分別為rh-EPO組、陰性對(duì)照組、EPO拮抗劑組、EPO+EPO拮抗劑組。每3天給藥1次,共5次。斷頸處死裸鼠,測(cè)量腫瘤的體積、重量。RT-PCR、Western-blot檢測(cè)瘤體內(nèi)EPO/EPO-R表達(dá)、TNF-α、IL-10、COX-2、BC

3、L-2;免疫組化檢測(cè)腫瘤內(nèi)微血管密度和VEGF的表達(dá);TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　1、rh-EPO有促進(jìn)MDA-MB-231細(xì)胞增殖的作用,經(jīng)NF-κB的抑制劑PDTC、p38MAPK抑制劑SB203580處理后,其促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用減退。經(jīng)JNK抑制劑SP600125、ERK抑制劑U0126作用后rh-EPO促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的作用幾乎不受影響。
　　2、ELISA結(jié)果表明rh-EPO能促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞

4、MDA-MB-231中的PGE-2、TNF-α的表達(dá),并呈時(shí)間、劑量依賴性。
　　3、rh-EPO組與其它3組相比,腫瘤的生長(zhǎng)迅速,瘤體的體積更大,重量更重(P<0.05)。
　　4.半定量RT-PCR及Westernblot結(jié)果表明,與陰性對(duì)照組相比,rh-EPO組EPO的表達(dá)量明顯增加(P<0.01)。與陰性對(duì)照組相比較,rh-EPO組、EPO拮抗劑組和EPO+EPO拮抗劑組的EPOR、TNF-α、IL-10表達(dá)量明顯較

5、高(P<0.05)。
　　5.免疫組化結(jié)果顯示,與其它3組相比,rh-EPO組的MVD值和VEGF的表達(dá)量均顯著升高(P<0.05)。
　　6、TUNEL結(jié)果顯示,rh-EPO組與其它3組相比凋亡指數(shù)明顯降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.rh-EPO可能是通過(guò)NF-κB、MAPK傳導(dǎo)通路發(fā)揮效應(yīng),促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231的增殖,促進(jìn)腫瘤微血管的形成和抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡。
　　2.rh-