基于AurorA-A抑制調(diào)控人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖與血管新生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　驗(yàn)證抑制Aurora-A表達(dá)后能否抑制人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖與促血管新生的能力，并初步探討相關(guān)作用機(jī)制。
　　方法:
　　以人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將特異siRNA轉(zhuǎn)染入細(xì)胞來(lái)抑制Aurora-A的表達(dá)。以轉(zhuǎn)染對(duì)照siRNA的細(xì)胞為對(duì)照組，用WesternBlot法驗(yàn)證低表達(dá)Aurora-A的實(shí)驗(yàn)組建立是否成功。以正常MDA-MB-231細(xì)胞作為對(duì)照組，應(yīng)用CCK-8

2、法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率，Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力，人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞小管生成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)促血管管腔形成能力，Elisa法檢測(cè)分泌至細(xì)胞外的VEGF蛋白水平，q-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)VEGFmRNA表達(dá)水平。結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，以SPSS20軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，P＜0.05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1、使用特異的siRNA轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞，WB的灰度分析結(jié)果顯示，相

3、較于正常MDA-MB-231細(xì)胞組，轉(zhuǎn)染特異Aurora-A siRNA的細(xì)胞中Aurora-A及p-Aurora-A的蛋白表達(dá)水平分別被下調(diào)32％、72％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p值均＜0.05）。
　　2、以正常MDA-MB-231細(xì)胞為對(duì)照組，沉默Aurora-A后24h對(duì)MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制率為17.9±2.7％。Transwell實(shí)驗(yàn)顯示沉默Aurora-A后突破基質(zhì)膠進(jìn)入Transwell下室的細(xì)胞數(shù)量為85

4、.8±10.6，明顯少于對(duì)照組的細(xì)胞數(shù)量119.2±10.9，減少28.0±14.1％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231細(xì)胞體外增殖、侵襲的能力減弱。
　　3、以正常MDA-MB-231細(xì)胞為對(duì)照組，HUVEC小管生成實(shí)驗(yàn)顯示沉默Aurora-A后形成的管腔形態(tài)不完整，HUVEC細(xì)胞排列不規(guī)則。管腔數(shù)目計(jì)數(shù)結(jié)果顯示沉默Aurora-A后形成的管腔數(shù)目為6.4±1.3，明顯少于對(duì)照組

5、的15.2±1.3，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231細(xì)胞的促血管生成能力減弱。
　　4、用q-PCR檢測(cè)兩組細(xì)胞VEGF的mRNA表達(dá)發(fā)現(xiàn)，沉默Aurora-A后，VEGF mRNA的表達(dá)量明顯下降，為對(duì)照組的14.3±0.9％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。用Elisa法檢測(cè)兩組細(xì)胞分泌至胞外VEGF的蛋白量，結(jié)果顯示對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白濃度為911.1±7.

6、0pg/ml，沉默Aurora-A組細(xì)胞培養(yǎng)上清中VEGF蛋白濃度為555.9±18.4 pg/ml，下降至對(duì)照組的61.0％，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。表明沉默Aurora-A后MDA-MB-231細(xì)胞的VEGF轉(zhuǎn)錄及蛋白分泌均受到明顯抑制。
　　結(jié)論:
　　1、成功利用Aurora-A siRNA轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞，使Aurora-A蛋白表達(dá)量下降。
　　2、抑制Aurora-A的表達(dá)后，能有效