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文檔簡介
1、目的:
探討ZIC1基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合姜黃素對人乳腺癌細胞M DA-MB-231增殖能力以及凋亡誘導(dǎo)能力的影響,以期尋找ZIC1基因與姜黃素在抑癌作用方面可能存在的協(xié)同作用,為我們將來進一步探討ZIC1聯(lián)合姜黃素在腫瘤形成中的機制提供實驗依據(jù)。
方法:
(1)通過在人乳腺癌細胞M DA-MB-231中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢病毒載體pLV-Zic1-PGK-Puro,并在熒光的顯微鏡下仔細觀察綠色的熒光蛋白的分布以及表達情況。
2、
(2)采用 Western blot法測定ZIC1轉(zhuǎn)染、空載的M DA-MB-231細胞中ZIC1蛋白的表達情況。
(3)通過MTT法檢驗不同濃度姜黃素對M DA-MB-231乳腺癌細胞的增殖能力的影響,篩選出最接近50%抑制率的有效濃度作為以下試驗的標準加藥濃度,結(jié)合細胞ZIC1轉(zhuǎn)染及空載,構(gòu)建成空載不加姜黃素組(對照組),空載加姜黃素組、轉(zhuǎn)染不加姜黃素組及轉(zhuǎn)染加姜黃素組(實驗組)。
(4)采用MTT法
3、檢測ZIC1、姜黃素及ZIC1聯(lián)合姜黃素對人乳腺癌細胞MDA-M B-231的細胞黏附能力的影響。
(5)采用劃痕實驗檢測ZIC1、姜黃素及ZIC1聯(lián)合姜黃素對人乳腺癌細胞MDA-M B-231的細胞遷移能力的影響。
(6)采用流式細胞術(shù)檢測ZIC1、姜黃素及ZIC1聯(lián)合姜黃素對人乳腺癌細胞MDA-M B-231的細胞凋亡的影響。
結(jié)果:
(1)通過在人乳腺癌細胞M DA-MB-231中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢
4、病毒載體pLV-Zic1-PGK-Puro48小時后,可以測定到綠色的熒光蛋白,轉(zhuǎn)染率達90%。
(2) Western blot法結(jié)果能夠顯示,ZIC1蛋白在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MDA-M B-231乳腺癌細胞中均有表達,而在空載細胞中均無表達。
(3) MTT法檢測結(jié)果顯示,5個濃度梯度的姜黃素(1,2.5,5,10,20mg/L)對ZIC1空載組和轉(zhuǎn)染組人乳腺癌細胞M DA-MB-231的抑制作用呈現(xiàn)藥物濃度的依賴性,同
5、時發(fā)現(xiàn)濃度為5mg/L的姜黃素對其作用48h后抑制率在50%左右。因此,5mg/L濃度的姜黃素,作為下面實驗的標準加藥濃度。
(4) MTT法檢測結(jié)果能夠顯示,與對照組進行比較,轉(zhuǎn)染ZIC1基因,或是加入5m g/L姜黃素,能夠明顯抑制M DA-MB-231乳腺癌細胞的黏附率,且轉(zhuǎn)染ZIC1聯(lián)合姜黃素對細胞的黏附能力的抑制最明顯。
(5)細胞劃痕實驗結(jié)果能夠顯示,與對照組進行比較,ZIC1基因、姜黃素以及兩者聯(lián)合均能
6、抑制M DA-MB-231乳腺癌細胞的遷移,存在著時間依賴性,并且兩者聯(lián)合效果更明顯。
(6)流式細胞術(shù)測定結(jié)果能夠顯示,三組實驗組的細胞的凋亡率明顯高于對照組,三組實驗組與對照組分別進行比較,存在統(tǒng)計學(xué)的意義(P<0.05);其中轉(zhuǎn)染加姜黃素組凋亡率最高(P<0.05),為(15.17±1.17)%;空載加姜黃素組凋亡率(7.34±1.33)%高于轉(zhuǎn)染不加姜黃素組(5.41±1.43)%;而對照組細胞的凋亡率僅是(2.49±
7、0.83)%。
結(jié)論:
(1)通過在人乳腺癌細胞M DA-MB-231中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢病毒載體pLV-Zic1-PGK-Puro,乳腺癌M DA-MB-231細胞中ZIC1基因的表達明顯增強;
(2)濃度為5mg/L的姜黃素對轉(zhuǎn)染組及空載組乳腺癌細胞M DA-MB-231作用48h后抑制率在50%左右;
(3) ZIC1基因的表達上調(diào),或是加入5mg/L姜黃素,可顯著抑制乳腺癌細胞M DA-MB-23
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