硒-甲基硒代半胱氨酸對乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生物學(xué)行為及MMP-2和骨橋蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究硒-甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine，MSC)對乳腺癌IMDA-MB-231細(xì)胞的生物學(xué)行為及基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase，MMP-2)和骨橋蛋白(osteopontin，OPN)表達(dá)的影響，探討MSC對乳腺癌細(xì)胞的作用靶點(diǎn)。 方法: 用不同濃度的MSC處理培養(yǎng)的MDA-MB-231細(xì)胞，CCK.8(cell counting Kit-8)

2、試劑盒、流式細(xì)胞儀(flow cytometry，F(xiàn)CM)及軟瓊脂生長實(shí)驗(yàn)分別檢測其對細(xì)胞生長、細(xì)胞周期分布和凋亡及腫瘤細(xì)胞惡性表型的影響，RT-PCR和Westernblot檢測MMP-2和OPN mRNA和蛋白水平的表達(dá)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbem assay，ELISA)檢測細(xì)胞培養(yǎng)液中MMP-2蛋白濃度。 結(jié)果: (1)MSC處理的細(xì)胞生長被抑制，出現(xiàn)S期阻滯和凋亡，

3、并呈時間和劑量依賴關(guān)系，且細(xì)胞集落形成數(shù)明顯減少。 (2)50μmol/L MSC處理細(xì)胞48 h和72 h后，MMP-2 mRNA表達(dá)水平分別較對照組上調(diào)32％和47％(P<0.05)，100μmol/LMSC處理細(xì)胞48 h和72 h后，MlVIP-2 mRNA表達(dá)水平分別較對照組上調(diào)53％和61％(P<0.05)。而Westernblot結(jié)果卻顯示，與對照組相比，25μmol/L MSC處理細(xì)胞72 h后MMP-2蛋白表

4、達(dá)水平下調(diào)33％(P<0.05)；50 μmol/L MSC處理細(xì)胞48和72 h后，MMP-2蛋白表達(dá)水平下調(diào)42％和51％(P<0.05)；100μmol/L MSC處理細(xì)胞48和72h后細(xì)胞的MMP-2蛋白表達(dá)水平分別下調(diào)73％和81％(P<0.05)。ELISA檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，25μmol/L MSC處理細(xì)胞48 h和72 h后，MMP-2濃度分別下調(diào)36.42％和60.63％(P<0.05)；50μmol/L MS

5、C處理細(xì)胞24 h、48 h和72 h后，MMP-2濃度分別下調(diào)20.80％、60.70％和76.69％(P<0.05)；100μmol/L處理細(xì)胞24 h、48 h和72 h后，MMP-2濃度分別下調(diào)24.44％、73.28％和83.59％(P<0.05)。 (3)RT-PCR和Western blot對OPN的檢測結(jié)果顯示不同濃度MSC處理細(xì)胞6 h、24 h、48 h和72 h后，OPN的表達(dá)均無明顯改變。 結(jié)論