黃芩素通過GPR30信號通路抑制雌激素誘導(dǎo)乳腺癌細胞的遷移、黏附和侵襲.pdf

1、目的：本研究旨在探討黃芩素能否通過GPR30信號通路發(fā)揮抑制雌激素誘導(dǎo)乳腺癌細胞的遷移、黏附和侵襲的作用。
　　方法:采用雌激素受體（ER）/G蛋白偶聯(lián)受體30（GPR30）陽性的乳腺腫瘤細胞MCF-7和ER陰性/GPR30陽性的SK-BR-3細胞為模型系統(tǒng)。常規(guī)細胞培養(yǎng)，給于E2或者G1誘導(dǎo)細胞，考察黃芩素對該模型細胞的影響，利用MTT法考察細胞活力的變化；利用劃痕修復(fù)實驗考察細胞遷移能力的變化；采用黏附實驗考察細胞對胞外基質(zhì)黏

2、附能力的變化；采用matrigel包被的transwell小室侵襲模型考察細胞侵襲能力的變化；應(yīng)用Western blot的方法考察蛋白表達的變化；應(yīng)用實時熒光定量PCR的方法（Real time PCR）考察GPR30相關(guān)靶基因mRNA水平的變化。
　　結(jié)果：（1）黃芩素在劑量為5，10和15μM時對給于或不給于E2的MCF-7或SK-BR-3細胞沒有明顯的細胞毒性作用。結(jié)果表明，5，10和15μM可以做為后續(xù)的實驗研究黃芩素的

3、劑量；（2）E2單獨作用24 h后，MCF-7和SK-BR-3細胞遷移明顯增強，而當給于黃芩素后，細胞遷移較少，黃芩素能夠抑制雌激素誘導(dǎo)細胞遷移；（3）E2單獨作用24 h后，MCF-7和SK-BR-3細胞與胞外基質(zhì)膠的黏附增強，而同時給于黃芩素后，細胞與基質(zhì)膠黏附能力下降。結(jié)果提示，黃芩素能夠抑制雌激素誘導(dǎo)細胞與基質(zhì)膠的黏附；（4）E2單獨作用24 h后，穿過基質(zhì)膠包被濾膜的細胞數(shù)目增加，而同時給藥黃芩后，浸潤的細胞數(shù)明顯下降。結(jié)果說

4、明，黃芩素能夠降低雌激素誘導(dǎo)下的細胞侵襲能力；（5）給于E2和黃芩素1 h后，MCF-7和SK-BR-3細胞的GPR30的表達保持不變，而表皮生長因子受體（EGFR）的酪氨酸磷酸化水平以及細胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）和絲氨酸/蘇氨酸激酶（Akt）的磷酸化水平明顯降低。結(jié)果提示，黃芩素對于GPR30的表達沒有影響，而抑制了雌激素介導(dǎo)的GPR30的信號的傳導(dǎo)；（6）在MCF-7和SK-BR-3細胞中，E2上調(diào)CYR61和CTGF基因，同時給

5、于黃芩素后，與E2組對比，2個基因在MCF-7和SK-BR-3細胞中下調(diào)。黃芩素能夠抑制E2誘導(dǎo)的GPR30信號通路下游與轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達。（7）用GPR30的激動劑G1刺激細胞，再給予黃芩素，黃芩素同樣能夠下調(diào)EGFR、ERK和AKT的磷酸化水平以及CYR61和CTGF基因的mRNA水平。結(jié)果表明，黃芩素能夠抑制GPR30信號通路的激活以及下游基因的表達。
　　結(jié)論：（1）黃芩素能夠抑制E2誘導(dǎo)細胞遷移的能力、與基底膠黏附的能