金雀異黃素通過調節(jié)miR-34a抑制乳腺癌細胞的增殖和侵襲.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，具有高發(fā)病率及死亡率，容易復發(fā)和轉移。近年來，在治療乳腺癌方面已經取得了巨大的成就，但仍不足以克服腫瘤細胞的逃跑和抵抗機制，我們需要進一步研究腫瘤發(fā)生發(fā)展的機制并發(fā)現(xiàn)更多高療效、低毒性的抗腫瘤藥物。
　　金雀異黃素是在豆制品中提取的一種大豆異黃酮。近年來的研究表明它具有抗癌特性，可用來治療各類型的癌癥，并且對正常細胞毒性低。金雀異黃素還可通過調節(jié)microRNA及其靶基因的表達來影響腫瘤的形成和發(fā)

2、展。然而，它在乳腺癌中如何通過調節(jié)microRNAs發(fā)揮抑癌作用尚未報道。
　　MicroRNA是一類長度約為20-25個核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA，主要是通過調控其靶基因的表達發(fā)揮作用，在人類腫瘤細胞中往往能發(fā)現(xiàn)miR-34a表達水平相對較低，而提高miR-34a的表達水平能促進各類型腫瘤細胞凋亡、細胞周期阻滯及衰老，抑制其增殖、遷移和侵襲。
　　HMGA2是一種非組蛋白染色質相關蛋白，主要功能是作為轉錄因子和癌胚蛋白

3、。HMGA2幾乎在所有惡性腫瘤中高表達，而在正常組織中未發(fā)現(xiàn)，并且在高級別和惡性程度較高的腫瘤中表達量較高，它與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及不良預后息息相關。
　　目的:研究金雀異黃素對miR-34a的表達以及乳腺癌細胞增殖、遷移和侵襲能力的影響，為金雀異黃素應用于臨床治療乳腺癌提供理論基礎和實踐依據;
　　方法:以人乳腺癌MCF-7細胞為對象，采用qRT-PCR技術檢測金雀異黃素對MCF-7細胞中miR-34a表達的影響，利用CCK-

4、8實驗檢測金雀異黃素作用48小時的半數(shù)抑制濃度，采用該濃度進行下面的實驗，將miR-34a模擬物轉染到MCF-7細胞系中，然后采取CCK-8實驗、克隆形成實驗、劃痕實驗及侵襲實驗驗證金雀異黃素和miR-34a及其聯(lián)合作用對MCF-7細胞增殖、克隆形成、遷移和侵襲能力的影響，western blotting和qRT-PCR實驗被用來研究金雀異黃素和miR-34a及其聯(lián)合作用以及miR-34a抑制物對HMGA2蛋白和mRNA水平的影響。轉染

5、siRNA-HMGA2至MCF-7細胞中，敲除HMGA2基因以探究HMGA2對乳腺癌細胞增殖和克隆形成能力的影響。
　　結果:1.金雀異黃素作用乳腺癌MCF-7細胞48小時的半數(shù)抑制濃度為8.05μM;2.金雀異黃素處理后，MCF-7細胞中miR-34a的表達量明顯上升;3.CCK-8結果顯示:金雀異黃素處理組活細胞比例為0.50±0.03，miR-34a處理組活細胞比例為0.46±0.01，金雀異黃素與miR-34a聯(lián)合處理組活

6、細胞比例為0.27±0.01，(P＜0.01)，金雀異黃素或miR-34a處理后，乳腺癌細胞的增殖能力受到了明顯抑制并且兩者聯(lián)合作用更加顯著;陰性對照組活細胞比例為0.91±0.02，siRNA-HMGA2組活細胞比例為0.37±0.02，敲除HMGA2能有效抑制乳腺癌細胞的增殖能力;4.克隆形成實驗結果顯示:4個組（空白對照組、金雀異黃素處理組、miR-34a處理組和聯(lián)合處理組）克隆集數(shù)量依次為204.67±9.07、104.33±1

7、1.93、95.33±10.11、54.67±8.33，(P＜0.01)，金雀異黃素或miR-34a處理后，乳腺癌細胞的克隆形成能力受到了明顯抑制并且兩者聯(lián)合作用更加顯著;空白對照、陰性對照和siRNA-HMGA2組克隆集數(shù)量依次為344±9.85、325.7±14.05、235±12.53，敲除HMGA2后乳腺癌細胞克隆形成能力明顯減弱;5.劃痕實驗結果顯示:上述4個組24小時細胞遷移率依次為50％、37.5％、27.8％、16.7％

8、，(P＜0.01)，金雀異黃素或miR-34a處理后，乳腺癌細胞的遷移能力受到了明顯抑制并且兩者聯(lián)合作用更加顯著;6.侵襲實驗結果顯示:上述4個組穿膜細胞數(shù)量依次為135.00±9.85、53.67±7.02、47.33±4.93、32.33±5.86，(P＜0.01)，金雀異黃素或miR-34a處理后，能夠抑制乳腺癌細胞的侵襲能力并且兩者聯(lián)合作用更加顯著;7.qRT-PCR和western blotting實驗結果顯示:與空白對照組相

9、比，金雀異黃素處理后或轉染miR-34a模擬物后， HMGA2 mRNA和蛋白表達均降低，并且兩者聯(lián)合作用更加顯著，而抑制miR-34能上調HMGA2的表達;HMGA2 siRNA-1能有效的敲除HMGA2基因，抑制其蛋白的表達。
　　結論:金雀異黃素或miR-34a均能抑制人乳腺癌MCF-7細胞的增殖能力、克隆形成能力、遷移能力和侵襲能力，并且金雀異黃素可能是通過上調miR-34a來抑制乳腺癌細胞的生物學功能的。金雀異黃素或mi