DEC1通過穩(wěn)定cyclin E調(diào)節(jié)乳腺癌細(xì)胞增殖.pdf

1、博士學(xué)位論文定cyclinE調(diào)節(jié)嬲細(xì)胞增殖DEClRegulatesBreastCancerCellProliferationbyStabilizingCyclinEProtein學(xué)號：11118044學(xué)科、‘專業(yè)：生物化工答辯日期：2015年7月22日大連理工大學(xué)DalianUniversityofTechnology大連理工大學(xué)博士學(xué)位論文摘要全球每年都有數(shù)百萬人死于癌癥，癌癥亦稱惡性腫瘤，它的無限制、無止境地增生往往與細(xì)胞周期紊亂

2、有關(guān)。越來越多的數(shù)據(jù)表明細(xì)胞周期蛋白cyclinE過表達(dá)或其基因擴(kuò)增與腫瘤形成密切相關(guān)。cyclinE的表達(dá)受多種因子的調(diào)節(jié)，這些因子通過調(diào)節(jié)cyclinE的轉(zhuǎn)錄、翻譯及翻譯后修飾進(jìn)而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。時鐘蛋白DECl作為一個重要的轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)節(jié)多種靶基因的表達(dá)，參與細(xì)胞分化、凋亡、衰老等生物學(xué)過程進(jìn)而調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前的研究結(jié)果表明DECl既可以抑制腫瘤的生長、介導(dǎo)p53誘導(dǎo)的細(xì)胞衰老，又可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生存起到抗凋亡的

3、作用，但是DECl如何調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞生存以及細(xì)胞周期進(jìn)程的分子機(jī)理還不清楚。因此本文著重研究了DECl如何影響乳腺癌細(xì)胞的增殖以及對細(xì)胞周期蛋白cyclinE穩(wěn)定性及功能的影響。本文主要工作如下：1通過克隆形成實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DECl的過表達(dá)抑制了MCF7和T47D細(xì)胞的生長。相反，干擾DECl后明顯抑制了細(xì)胞集落的大小和數(shù)量。2在MCF7細(xì)胞中通過免疫印跡、流式細(xì)胞術(shù)等方法研究DECl表達(dá)的變化。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)時鐘蛋白DECl在細(xì)胞周期的

4、進(jìn)程中其自身表達(dá)存在周期性，主要在G1／S期表達(dá)量較高，其表達(dá)的變化與細(xì)胞周期蛋白cyclinE相似。在MCF7和T47D兩種乳腺癌細(xì)胞中，DECl以劑量依賴的方式上調(diào)cyclinE蛋白含量，并且不影響cyclinE的mRNA水平。3DECl上調(diào)cyclinE的蛋白含量但不影響其轉(zhuǎn)錄，因此可能影響cyclinE的降解。通過半衰期實(shí)驗(yàn)證實(shí)DECl穩(wěn)定了cyclinE，延長了cyclinE的半衰期。通過免疫印跡實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)DECl對cycli

5、nE的調(diào)節(jié)依賴cyclinE的泛素E3酶Fbw7，通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)DECl抑制cyclinE與Fbw7a相互作用，抑制cyclinE的泛素化，進(jìn)而穩(wěn)定cyclinE。4通過免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，哺乳動物雙雜交實(shí)驗(yàn)證實(shí)在血清饑餓及正常條件下DECl與周期蛋白cyclinE存在相互作用。同時，內(nèi)源的實(shí)驗(yàn)也驗(yàn)證了DECl與cyclinE存在相互作用。通過熒光共定位實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，cyclinE與DECl很好的定位在細(xì)胞核中。另外，檢測了DECl與c