PCGEM1通過TGF-β-smad通路調(diào)節(jié)胰腺癌細(xì)胞增殖、遷移和侵襲.pdf

1、胰腺癌是目前惡性程度最高的消化道腫瘤之一，發(fā)病率及死亡率在全世界都呈現(xiàn)上升趨勢，胰腺癌進(jìn)展極快，并且起病隱匿，是目前預(yù)后最差的惡性腫瘤，由于胰腺癌的早期發(fā)現(xiàn)和早期干預(yù)非常困難，大多數(shù)胰腺癌患者發(fā)現(xiàn)時已發(fā)生轉(zhuǎn)移，因此轉(zhuǎn)移是胰腺癌治療中的重大難題。然而胰腺癌轉(zhuǎn)移是多因素參與的復(fù)雜過程，機(jī)制尚未明確，因此很有必要從分子水平明確發(fā)病機(jī)制，進(jìn)一步尋找相應(yīng)的干預(yù)途徑和分子靶向治療。
　　長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA

2、,lncRNA)是長度在200~100000 nt之間不編碼蛋白的RNA分子，目前已知在多個層面調(diào)控基因表達(dá)，參與胚胎發(fā)育、細(xì)胞代謝、生長、分化等多種生理過程。近期研究發(fā)現(xiàn)，lncRNA在腫瘤細(xì)胞中常有異常的表達(dá)，其上調(diào)或下調(diào)可促進(jìn)或者抑制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，作用類似于癌基因或是抑癌基因。
　　PCGEM1是前列腺癌的特異性lncRNA，位于染色體2q32位點(diǎn)，在前列腺癌LNCaP細(xì)胞和小鼠成纖維NIH3T3細(xì)胞中高表達(dá)，能促進(jìn)前列

3、腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，并抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，可作為評價前列腺癌風(fēng)險及其預(yù)后的可靠指標(biāo)，是前列腺癌潛在的基因治療靶點(diǎn)。
　　研究目的：
　　1、探討PCGEM1在胰腺癌中的表達(dá)及在胰腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為中的作用。
　　2、探究潛在的分子機(jī)制，為臨床針對胰腺癌的基因治療提供理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、熒光定量PCR檢測人胰腺癌組織和癌旁組織及3種人胰腺癌細(xì)胞中PCGEM1的表達(dá)水平。
　　2、

4、上調(diào)或下調(diào)PCGEM1在人胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)后，檢測PCGEM1對細(xì)胞增殖、遷移和侵襲能力的影響
　　2.1.分別在BxPC3和PaTu8988細(xì)胞中轉(zhuǎn)染pCDH-PCGEM1及其空載質(zhì)粒pCDH,在SW1990細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA和其對照siRNA，并檢測轉(zhuǎn)染效率。
　　2.2.細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)、CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力。
　　2.3.transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移、侵襲能力。
　　3、上調(diào)

5、或下調(diào)PCGEM1在胰腺癌細(xì)胞中的表達(dá)后，檢測EMT相關(guān)蛋白及TGF-β/smad通路相關(guān)蛋白的變化。
　　3.1.Western blot法及免疫熒光法檢測EMT相關(guān)蛋白表達(dá)水平，熒光定量PCR檢測MMP2、MMP9的mRNA表達(dá)水平。
　　3.2.Western blot法檢測TGF-β/smad通路相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　研究結(jié)果：
　　1、相對于癌旁組織，胰腺癌組織中PCGEM1表達(dá)水平較高。PCGEM

6、1差異性表達(dá)于3種胰腺癌細(xì)胞中，其中SW1990表達(dá)水平相對較高，BxPC3和PaTu8988表達(dá)水平相對較低。
　　2、過表達(dá)PCGEM1可促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。
　　2.1.成功在BxPC3和PaTu8988細(xì)胞中過表達(dá)PCGEM1，在SW1990細(xì)胞中降低PCGEM1的表達(dá)。
　　2.2.過表達(dá)PCGEM1后，細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)，相反，降低PCGEM1表達(dá)，細(xì)胞增殖能力減弱。
　　2.3.胰腺

7、癌細(xì)胞遷移和侵襲能力與PCGEM1表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　3、PCGEM1通過TGF-β/smad通路促進(jìn)EMT過程。
　　3.1、Western blot法、熒光定量PCR示MMP2、MMP9的mRNA及蛋白在過表達(dá)PCGEM1后明顯增加，反之減少。Western blot法和免疫熒光法結(jié)果顯示過表達(dá)PCGEM1后α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ蛋白的表達(dá)量顯著增加，而E-cadherin的表達(dá)量顯著降低，

8、而降低PCGEM1后相反。
　　3.2、Western blot法結(jié)果表明過表達(dá)PCGEM1可以與smad2和smad3的磷酸化正相關(guān)，并增高了TGF-β和TGF-βreceptor的表達(dá)水平，并與smad4的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而降低PCGEM1表達(dá)后結(jié)果相反。
　　研究結(jié)論：
　　1、PCGEM1相對高表達(dá)于胰腺癌組織中，并差異性表達(dá)于不同胰腺癌細(xì)胞系。
　　2、PCGEM1促進(jìn)胰腺癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力。<