Smad-4靶向基因干預對胰腺癌細胞增殖和凋亡的作用研究.pdf

1、背景:胰腺癌是重要的消化道惡性腫瘤之一,其早期診斷和臨床治療都堪稱棘手。臨床實踐表明,對于胰腺癌的治療,單純手術的治療效果是有限的,同時由于腫瘤耐藥性的產生,化療的治療效果也不佳。為了提高胰腺癌患者的生存率,迫切需要研究新的有效療法如介入治療和基因治療。對胰腺癌發(fā)病機理及其生物學特性的進一步闡明將有助于發(fā)現新型的分子水平的靶向治療藥物,制定新的治療方案,最終提高胰腺癌治療效果。Smad-4/DPC-4是胰腺癌發(fā)生的較特異的腫瘤抑制基因。

2、目前研究發(fā)現:(1)該基因純合性缺失或突變可導致TGF-β/Smad-4信號傳導通路缺陷;(2)腫瘤細胞可能通過Smad-4突變抵抗化療誘發(fā)的細胞凋亡;(3)Smad-4/DPC-4可通過誘導p21waf1表達,并通過抑制細胞周期進展而抑制腫瘤細胞生長?；赟mad-4/DPC-4在胰腺癌生物學行為中的重要性,本實驗在細胞水平及動物實驗水平評價了Smad-4基因干預對胰腺癌細胞增殖和凋亡的作用。研究結果對應用Smad-4/DPC-4靶向

3、基因治療胰腺腫瘤,最終延長患者的生存期有重要意義。目的:Smad-4基因為胰腺癌特異的腫瘤抑制基因,屬于轉化生長因子β超家族。其基因的缺失、突變可導致細胞過度增殖,在胰腺癌發(fā)生,發(fā)展及轉移過程中起重要作用。本研究利用Smad-4基因缺陷細胞株、Smad-4穩(wěn)定表達細胞株以及對照細胞株,在細胞水平及動物實驗水平研究了Smad-4對胰腺癌細胞生物學行為的影響及作用機理。方法:不同濃度(0～30μM)的吉西他濱作用于人類胰腺癌細胞株CFPAC

4、-1(野生型)、CFPAC-1(穩(wěn)定表達Smad4)[DPC-4型]、CFPAC-1(穩(wěn)定表達空白載體)[TJM型],選用不同實驗方法觀察形態(tài)學和分子生物學特性的改變。四唑鹽比色實驗(MTT方法)觀察不同濃度吉西他濱對3種細胞株增殖的影響;流式細胞術檢測藥物誘導下3種細胞株的凋亡情況;劃痕實驗觀察吉西他濱對3種胰腺癌細胞株遷移能力的影響;3種胰腺癌細胞系經皮膚接種方式移植入裸鼠,經化療藥物處理后觀察Smad-4基因表達對裸鼠移植腫瘤的影

5、響。統(tǒng)計學處理用SPSS13.0軟件完成,計量資料數據表示方式以平均值±標準差(Mean±SD),兩組計量資料采用非獨立樣本t檢驗,各組指標間的相關性采用Spearman等級相關分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學顯著性意義。結果:MTT結果顯示不同濃度吉西他濱處理后,DPC-4型胰腺癌細胞的增殖受到不同程度的抑制,且這種抑制作用呈劑量依賴性,其半數有效濃度約為14.5gM。流式細胞術提示吉西他濱可以明顯促進DPC-4型胰腺癌細胞株的凋亡。