靶向阻斷RAGE-配體軸對胰腺癌細(xì)胞PANC-1增殖和侵襲抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、背景與目的；晚期糖基化終末產(chǎn)物受體是一類多功能多配體受體，參與調(diào)控糖尿病、炎癥、阿爾海默病等多種病理過程。此外，近期研究表明RAGE及其配體在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中扮演了重要的角色，RAGE-配體系統(tǒng)可通過自分泌方式直接刺激腫瘤細(xì)胞的增殖生長、侵襲轉(zhuǎn)移并能增強(qiáng)其耐藥性。本實(shí)驗(yàn)首先研究胰腺癌高侵襲性細(xì)胞株P(guān)ANC-1中RAGE的表達(dá)情況，分析利用特異性封閉型抗RAGE單克隆抗阻斷RAGE-配體生物軸對胰腺癌細(xì)胞體外生長侵襲的影響，并對其可能的分

2、子機(jī)制進(jìn)行了初步探討。 方法：①體外培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞PANC-1，RT-PCR、FCM法檢測胰腺癌細(xì)胞PANC-1表面RAGE mRNA及蛋白的表達(dá)情況。②不同濃度的anti-RAGE單抗分別與人胰腺癌細(xì)胞PANC-1共同培養(yǎng)相應(yīng)時(shí)間，MTT法觀察細(xì)胞生長情況，流式細(xì)胞儀FCM檢測細(xì)胞增殖凋亡情況及細(xì)胞周期改變。免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測調(diào)亡相關(guān)蛋白NF-rb、Caspase-3、Bcl-2的胞內(nèi)表達(dá)情況。⑧,Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)觀

3、測anti-RAGE單抗作用后胰腺癌細(xì)胞PANC-1侵襲能力的變化，半定量RT-PCR、ELISA、免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察胰腺癌細(xì)胞PANC-1中MMP-2、9mRNA及蛋白的表達(dá)情況變化。 結(jié)果：①胰腺癌細(xì)胞PANC-1表面高表達(dá)RAGE。②Anti-RAGE單抗可抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1的體外生長，在一定范圍內(nèi)呈時(shí)間、劑量依賴性，表現(xiàn)為細(xì)胞阻滯于G1期，凋亡發(fā)生增多，凋亡率上升，NF-Kb、Bcl-2表達(dá)明顯減少，Caspas

4、e-3表達(dá)量增強(qiáng)。⑧Anti-RAGE作用后PANC-1細(xì)胞的透膜侵襲轉(zhuǎn)移能力明顯受到抑制，在一定范圍內(nèi)呈劑量依賴性，同時(shí)PANC-1細(xì)胞MMP-2、9的表達(dá)明顯減弱。 結(jié)論：胰腺癌細(xì)胞PANC-1表面存在RAGE(晚期糖基化終末產(chǎn)物受體)的陽性表達(dá)，應(yīng)用封閉型anti-RAGE單克隆抗體可特異性阻斷RAGE介導(dǎo)的受體信號途徑，通過下調(diào)NF-rb、Bcl-2、MMP-2、MMP-9，上調(diào)Caspase-3，從而抑制胰腺癌細(xì)胞PA