丙酮酸乙酯對(duì)人胰腺癌細(xì)胞的抑制作用.pdf

1、背景:胰腺癌起病隱匿，預(yù)后較差，80％患者在確診時(shí)已經(jīng)有局部侵犯及血行轉(zhuǎn)移、淋巴轉(zhuǎn)移，因而失去手術(shù)機(jī)會(huì)。雖然胰腺癌化療的療效較差，但是化療仍然是治療的重要手段之一。在腫瘤化療的過(guò)程中，耐藥現(xiàn)象的存在，尤其是獲得性耐藥，嚴(yán)重阻礙了化療藥物的應(yīng)用。5-氟尿嘧啶(5-florouracil，5-FU)等抗腫瘤化療藥物因不良反應(yīng)較大且產(chǎn)生耐藥等現(xiàn)象影響了其在臨床上應(yīng)用。因此，抗腫瘤增效減毒劑或替代劑的開發(fā)研究就顯得尤為重要。高遷移率族蛋白B1(

2、high mobility group protein B1，HMGB1)是一種重要的晚期炎癥介質(zhì)，其豐富表達(dá)于未成熟細(xì)胞及惡性細(xì)胞中，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的與神經(jīng)軸突伸長(zhǎng)及腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的染色質(zhì)蛋白，其在消化道間質(zhì)瘤、前列腺癌、乳腺癌和小細(xì)胞肺癌等組織中呈高表達(dá)，而且其表達(dá)程度與患者的預(yù)后及腫瘤的轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。胰腺癌早期即可侵犯周圍器官及淋巴、血管和神經(jīng)叢，而且沿神經(jīng)叢擴(kuò)散是胰腺癌特有的轉(zhuǎn)移方式。HMGB1在胰腺癌細(xì)胞的侵襲、

3、轉(zhuǎn)移過(guò)程中作用重要，它能促使細(xì)胞外基質(zhì)的降解，促進(jìn)胰腺癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。HMGB1通過(guò)與末期糖基化終產(chǎn)物受體(advanced glycation end products，RAGE)的結(jié)合，激活了NF-κβ、p38MAKE、JNK、p42/p44MAPK和Rac/Cdc42信號(hào)通路，繼而引起基質(zhì)蛋白酶MMP-2和MMP-9的激活，使細(xì)胞外基質(zhì)降解，促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移。阻斷HMGB1-RAGE之間相互作用，可以抑制p44/p42、p38、

4、SAP/JNK MAPK激酶激活，抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤的轉(zhuǎn)移，致使腫瘤休眠期延長(zhǎng)，減少腫瘤增殖、侵襲及基質(zhì)金屬酶的活力。因此，HMGB1的拮抗劑也許是治療和預(yù)防胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的潛在治療藥物。目前所知的HMGB1拮抗劑主要有三種：抗HMGB1抗體、Abox和丙酮酸乙酯(ethy1pyruvate，EP)。EP是一種穩(wěn)定的親脂性丙酮酸衍生物，具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，可抑制BALB/C小鼠巨噬細(xì)胞樣RAw264.7細(xì)胞在內(nèi)毒素刺激下的HMGB1和T

5、NF-α的釋放及胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶p38和NF-κβ信號(hào)途徑的激活。本研究以PANC-1/AsPC-1細(xì)胞為研究對(duì)象，來(lái)觀察丙酮酸乙酯與5-氟尿嘧啶對(duì)胰腺癌細(xì)胞的抑制作用，為胰腺癌的預(yù)防和治療提供新的思路。
　　 目的:觀察丙酮酸乙酯與5-氟尿嘧啶單獨(dú)及聯(lián)合作用對(duì)人胰腺癌PANC-1/AsPC-1細(xì)胞增殖和凋亡及對(duì)細(xì)胞中HMGB1基因表達(dá)水平的影響。
　　 方法:采用MTT法檢測(cè)EP及5-FU單獨(dú)及聯(lián)合作用(EP組，E組：

6、5-FU組，F(xiàn)組；聯(lián)合組，EF組)對(duì)胰腺癌PANC-1/AsPC-1細(xì)胞增殖的影響；流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry，F(xiàn)CM)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率；通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real timePCR，RT-PCR)檢測(cè)各用藥組胰腺癌細(xì)胞PANC-1/AsPC-1中HMGB1mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:與陰性對(duì)照組相比較，各用藥組均能提高胰腺癌細(xì)胞抑制率(P＜0.05)，且EF組的胰腺癌細(xì)胞抑制率，比E組高(P＜0.05)；E0

7、.5225F10、E1.0450F20、E2.0900F40、E3.1350F80組的胰腺癌細(xì)胞抑制率均比相應(yīng)E組高(P＜0.05)；且E0.5225、E1.0450、E2.0900、E3.1350組的細(xì)胞抑制率均比相應(yīng)F組高(P＜0.05)。EF組的胰腺癌細(xì)胞凋亡率均比E組高(P＜0.05)；且E組的細(xì)胞凋亡率均比相應(yīng)的F組的細(xì)胞凋亡率高(P＜0.05=。E3.1350F80、E4.1800F160組比相應(yīng)E組的胰腺癌細(xì)胞HMGB1基