靶向載藥納米粒子的制備及對胰腺癌細胞抑制作用的實驗研究.pdf

1、胰腺癌是一種預后極差的惡性腫瘤，目前就胰腺癌的早期診斷及綜合治療投入巨大但效果甚微?；熥鳛橐认侔┲委煹闹匾侄沃皇艿綇V泛重視，但其生物利用度差及全身毒性等不足嚴重影響其療效。納米技術可以有效彌補以上不足。表皮生長因子受體(Epidermal growthfactor receptor，EGFR)在胰腺癌中呈過表達狀態(tài)，因此可將其作為分子靶向劑標記于納米粒子表面從而達到胰腺癌細胞靶向識別治療的目的。本研究中我們將展示一個以納米粒子為基

2、礎的用于胰腺癌治療且逐步發(fā)展的遞送系統(tǒng)。
　　本實驗中通過調控納米粒子制備過程的溫度、攪拌速度、穩(wěn)定劑及原料劑量等條件制備出粒徑分別為(25±7.6) nm，(49±8.6) nm，(88±20.5) nm，(145±13.5) nm，(205±8.4) nm的5種負載吲哚青綠的聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子（Polybutylcyanoacrylatenanoparticles carrying Indocyanine green，

3、ICG-PBCA-NPs）。利用紫外/可見光分光光度計測定并繪制吲哚青綠（Indocyanine green，ICG）溶液的標準曲線。選取健康雄性小鼠隨機分為7組，每組小鼠分別于給藥1，5，12h后處死，解剖獲得心、肝、脾、腎和胰腺樣品并制作成冰凍切片用于熒光觀察。另外，將給藥0.5，1，5和12h后的心、肝、脾、腎和胰腺樣品制備成勻漿，離心后以紫外可見光分光光度計測定ICG的A值，利用標準曲線計算相應ICG濃度。結果均發(fā)現(xiàn)(25±7.

4、6)nm組于小鼠各組織中無明顯分布。胰腺組織于(49±8.6) nm粒子組熒光強度明顯強于其他各組，肝臟、脾臟于納米粒徑為(145±13.5)nm時出現(xiàn)最強熒光。心臟熒光強度隨粒徑變化不大且較弱。另外，隨著粒徑減小ICG-PBCA-NPs在各組織中最強熒光出現(xiàn)時間縮短。
　　在以上研究基礎上通過乳化聚合法制備粒徑大小約為50nm的負載五氟尿嘧啶聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子（Polbutylcyanoacrylatenanoparti

5、cles carrying5-fluorouracil，5-Fu-PBCA-NPs）及偶聯(lián)抗EGFR單抗的負載五氟尿嘧啶聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(EGFR-graftedpolybutylcyanoacrylate nanoparticles carrying5-fluorouracil,5-Fu-EGFR-NPs)。然后運用酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測5-Fu-EGFR-NPs中抗體活性。通過MTT比色法檢測50，40，30，20，10，5

6、ug·mL-1濃度下PBCA-NPs組、5-Fu-PBCA-NPs組、5-Fu-EGFR-NPs及五氟尿嘧啶(5-fluorouracil，5-Fu)原藥組在12，24，48h對胰腺癌細胞的生存率的抑制作用。結果提示聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒子(polybutylcyanoacrylate nanoparticles carrying5-fluorouracil,PBCA-NPs)具有一定的安全性;經(jīng)靶向抗體抗EGFR單抗修飾后的5-Fu

7、-EGFR-NPs與5-Fu-PBCA-NPs比較于24h時差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，48h時顯示出明顯差異(P＜0.01);5-Fu裸藥組12，24h時抑瘤效果強于5-Fu-PBCA-NPs組(P＜0.05，P＜0.01)，然而當作用48h后5-Fu裸藥組的抑瘤效果明顯弱于5-Fu-PBCA-NPs組(P＜0.01);另外5-Fu-PBCA-NPs，5-Fu-EGFR-NPs及5-Fu三組抑瘤率均顯示出劑量依賴性。