miR-181a的表達(dá)載體構(gòu)建及其在胰腺癌細(xì)胞中抑制作用的初步探討.pdf

1、背景：胰腺癌是發(fā)病率高、預(yù)后差、死亡率高的惡性腫瘤，它發(fā)生轉(zhuǎn)移早，手術(shù)切除困難，對(duì)放化療不敏感。因此，尋找新的腫瘤標(biāo)記和基因治療方法有十分重要的意義。miRNA是一種長(zhǎng)度為21-25bp的單鏈非編碼RNA，不編碼蛋白質(zhì)，功能為負(fù)調(diào)控轉(zhuǎn)錄后水平的基因表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的代謝、增殖、分化和凋亡等過(guò)程。K-RAS是一原癌基因，在胰腺癌中90％以上的病例中有突變，已有證據(jù)表明在肺癌中受miRNA作用，如let-7[6-7]。近年的研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌

2、中miRNA表達(dá)譜與慢性胰腺炎和正常胰腺中有很大差異，并確定了某些miRNA分子在胰腺癌中的靶基因和具體作用。 目標(biāo)：構(gòu)建重組MiR-181a載體，表達(dá)miR-181a，并進(jìn)一步研究MiR-181a對(duì)胰腺癌細(xì)胞的生長(zhǎng)、凋亡、遷移作用的影響及其對(duì)癌基因K-RAS的作用。 方法： 1、以pcDNA4.0為載體骨架，用限制性內(nèi)切酶和PCR方法構(gòu)建pcDNA4.0-EGFP載體和pcDNA4.0-EGFP-MiR-181

3、a載體，作為標(biāo)記空載體和表達(dá)MiR-181a載體。 2、轉(zhuǎn)染胰腺癌細(xì)胞系panc-1和mia paca-2，檢測(cè)處理組和非處理組生長(zhǎng)、凋亡、遷移情況和K-RAS蛋白的表達(dá)。 結(jié)果： 1、轉(zhuǎn)染重組MiR-181a載體后可降低parlc-1細(xì)胞系中K-RAS蛋白表達(dá)； 2、轉(zhuǎn)染重組MiR-18la載體減緩panc-1和mia paca-2細(xì)胞生長(zhǎng)； 3、轉(zhuǎn)染重組MiR-181a載體增加panc-1和m