miR-181a--CARF靶向關(guān)系在胰腺癌中的研究.pdf

1、目的：
　　 研究miR-181a在胰腺癌中的表達(dá)情況，驗(yàn)證miR-181a與CARF基因的靶向關(guān)系，并探討其在該疾病中的功能，為闡明胰腺癌發(fā)病機(jī)制，尋求有效的治療途徑提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 材料和方法：
　　 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)并比較胰腺癌組織/細(xì)胞與正常胰腺組織/細(xì)胞中miR-181a的表達(dá)情況，通過轉(zhuǎn)染miR-181a inhibitor下調(diào)PancⅠ胰腺癌細(xì)胞中miR-181a的濃度，分

2、別用MTT試驗(yàn)評(píng)價(jià)腫瘤細(xì)胞增殖能力和FCM檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀況。在生物信息學(xué)靶基因預(yù)測(cè)的基礎(chǔ)上，構(gòu)建攜帶CARF基因3’-UTR序列的PGL-3報(bào)告基因載體，利用雙熒光素酶報(bào)告基因技術(shù)，驗(yàn)證miR-181a與CARF基因的靶向關(guān)系。同時(shí)，通過轉(zhuǎn)染成熟hsa-miR-181a和miR-181a inhibitor分別上調(diào)和下調(diào)PancⅠ細(xì)胞中miR-181a的濃度，觀察CARF基因在轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的變化。用經(jīng)上述處理的PancⅠ細(xì)胞建立裸鼠胰

3、腺癌皮下移植瘤模型，觀察miR-181a濃度變化對(duì)PancⅠ細(xì)胞體內(nèi)成瘤能力的影響，并檢測(cè)移植瘤中CARF基因在翻譯及轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)相對(duì)于正常胰腺組織和器官，胰腺癌組織和細(xì)胞中miR-181a的表達(dá)水平明顯升高(p<0.05)。PancⅠ細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-181a inhibitor后，PancⅠ胰腺癌細(xì)胞中miR-181a的表達(dá)水平明顯下調(diào)，MTT及FCM檢測(cè)結(jié)果顯示該組細(xì)胞相對(duì)于對(duì)照組

4、細(xì)胞的增殖能力顯著下降，細(xì)胞凋亡率明顯上升。(2)基因測(cè)序結(jié)果表明，攜帶CARF基因3’-UTR序列的PGL-3報(bào)告基因載體構(gòu)建成功，與成熟hsa-miR-181a共轉(zhuǎn)于細(xì)胞后，熒光素酶活性較對(duì)照組明顯下降，且與hsa-miR-181a濃度呈明顯負(fù)相關(guān)；miR-181a濃度與CARF蛋白表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)，而與CARF mRNA水平無明顯相關(guān)性。(3)經(jīng)轉(zhuǎn)染成熟hsa-miR-181a和miR-181ainhibitor的PancⅠ細(xì)