MiR-548ac-Notch1信號通路在胰腺癌中的作用研究.pdf

1、目的：
　　胰腺癌目前仍是人類惡性程度最高的癌癥之一，由于缺乏有效的早期診斷手段，大多病例被發(fā)現(xiàn)時已是晚期。傳統(tǒng)手術(shù)及化療等手段對胰腺癌的治療沒有重大進(jìn)展。因而迫切需要明確胰腺癌的發(fā)病機(jī)制。MicroRNAs已經(jīng)被廣泛證明調(diào)控多種腫瘤的生物學(xué)事件，包括胰腺癌。MiR-548ac屬于miR-548家族，該家族被報道參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，但具體的機(jī)制仍不清楚。miR-548ac在胰腺癌中未曾被研究，其在胰腺癌中的作用尚不明確。因此，本研

2、究主要探討miR-548ac在胰腺癌中的作用，并進(jìn)一步研究其可能的調(diào)控機(jī)制。
　　方法：
　　采集在2012年7月至2015年2月期間在武漢協(xié)和醫(yī)院胰腺外科行手術(shù)治療的50例胰腺癌患者病例及組織標(biāo)本（其中男性患者24例,女性患者26例）。通過qRT-PCR檢測胰腺癌組織中miR-548ac及Notch1的相對表達(dá)量，進(jìn)一步分析這兩者之間的相關(guān)性。構(gòu)建雙熒光素酶報告基因載體，共轉(zhuǎn)染miR-548ac的類似物，觀察胰腺癌細(xì)胞系中

3、miR-548ac對Notch1直接作用關(guān)系。
　　細(xì)胞轉(zhuǎn)染使用脂質(zhì)體2000作為載體，將miR-548ac類似物轉(zhuǎn)染至PANC-1和BxPC-3細(xì)胞中。運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR檢測miR-548ac的表達(dá)，分析轉(zhuǎn)染效率。Western blot檢測Notch1蛋白水平的變化。通過MTT法檢測胰腺癌細(xì)胞在活體外的增殖。皮下種植瘤模型觀察胰腺癌細(xì)胞的成瘤能力。細(xì)胞的侵襲能力的檢測采用Transwell實(shí)驗(yàn)法。
　　結(jié)果：

4、　　qRT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)miR-548ac在50例胰腺癌組織和4個胰腺癌細(xì)胞系中表達(dá)明顯低于癌周正常胰腺組織或正常胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞。miR-548ac的表達(dá)下調(diào)與腫瘤體積、臨床分期、淋巴結(jié)侵襲和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。胰腺癌細(xì)胞行為學(xué)研究顯示增加miR-548ac的表達(dá)能明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖，減弱胰腺癌細(xì)胞裸鼠體內(nèi)成瘤能力。同時，miR-548ac能明顯抑制胰腺癌細(xì)胞的遷徙和侵襲。雙熒光素酶報告實(shí)驗(yàn)顯示miR-548ac mimics能

5、明顯降低Notch1的野生型3’UTR的熒光素酶活性，說明miR-548ac與Notch1 mRNA的3’UTR能夠直接相作用。Notch1在胰腺癌組織中高表達(dá)，且這種高表達(dá)同miR-548ac在胰腺癌中的低表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性。胰腺癌細(xì)胞上調(diào)miR-548ac的表達(dá)，能夠降低Notch1在mRNA和蛋白的表達(dá)水平，顯示miR-548ac靶向調(diào)控Notch1。進(jìn)一步干擾Notch1的表達(dá)，胰腺癌細(xì)胞呈現(xiàn)與miR-548ac過表達(dá)相同的結(jié)果。<