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文檔簡介
1、目的:
觀察Wnt2蛋白在胰腺癌組織中的表達(dá)狀況及其對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖遷移侵襲等生物學(xué)行為的影響;初步探討Wnt2蛋白影響侵襲轉(zhuǎn)移的途徑;探討Wnt2蛋白在胰腺癌星形細(xì)胞對(duì)胰腺癌細(xì)胞影響過程中發(fā)揮的作用。
方法:
1.胰腺癌組織病理Wnt2蛋白免疫組化染色,分析Wnt2蛋白在胰腺癌腫瘤組織與癌旁組織中表達(dá)的差異;并結(jié)合臨床病理參數(shù)分析Wnt2與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系;對(duì)病例資料進(jìn)行隨訪觀察,根據(jù)不同Wnt2蛋
2、白表達(dá)狀況作生存分析。
2.構(gòu)建Wnt2過表達(dá)質(zhì)粒和干擾RNA、應(yīng)用Wnt2重組蛋白,觀察不同Wnt2蛋白表達(dá)水平的胰腺癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為。
3.利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和Western Blot方法檢測(cè)Wnt2重組蛋白培養(yǎng)及干擾與過表達(dá)Wnt2后胰腺癌細(xì)胞EMT關(guān)鍵基因的mRNA和蛋白水平的表達(dá);
4.檢測(cè)Wnt2蛋白在胰腺癌星形細(xì)胞及其上清中的表達(dá)情況,檢測(cè)星形細(xì)胞培養(yǎng)上清對(duì)胰腺癌細(xì)胞功能的影響。<
3、br> 結(jié)果:
1.通過對(duì)86例胰腺癌組織病理切片的Wnt2蛋白免疫組化染色發(fā)現(xiàn),55例(63.5%)病理切片中胰腺癌細(xì)胞 Wnt2蛋白表達(dá)陽性;77例(89.5%)間質(zhì)細(xì)胞Wnt2表達(dá)陽性;Logistic回歸分析顯示:胰腺癌間質(zhì)細(xì)胞Wnt2蛋白表達(dá)與生存時(shí)間及無病生存期(DFS)相關(guān)(P=0.002、P=0.007),生存分析顯示免疫組化間質(zhì)細(xì)胞染色評(píng)分大于10分的患者生存期與評(píng)分小于10分的患者相比有顯著性差異(P=0
4、.019)。
2.生物學(xué)行為觀察結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,胰腺癌細(xì)胞株過表達(dá)組、應(yīng)用 Wnt2重組蛋白組胰腺癌細(xì)胞增殖速度均加快(P<0.05);而干擾組的細(xì)胞增殖速度受抑制(P<0.05);應(yīng)用 Wnt2重組蛋白組胰腺癌細(xì)胞遷移(P<0.05)及侵襲能力增強(qiáng)(P<0.05)。
3.胰腺癌細(xì)胞EMT關(guān)鍵基因的mRNA的表達(dá)結(jié)果:RT-PCR結(jié)果顯示W(wǎng)nt2重組蛋白培養(yǎng) CFPAC-1和PANC-1細(xì)胞6小時(shí)后,Wnt2
5、重組蛋白培養(yǎng)組的Vimentin基因相對(duì)表達(dá)量分別是對(duì)照組的2.06倍(P<0.05)和1.96倍(P<0.05);E-cadherin基因相對(duì)表達(dá)量分別是對(duì)照組的0.47倍(P>0.05)及0.33倍(P<0.05);PANC-1細(xì)胞干擾及過表達(dá)組Vimentin、E-Cadherin基因相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組之間無顯著性差異。胰腺癌細(xì)胞EMT關(guān)鍵基因的蛋白表達(dá)水平:Western Blot結(jié)果顯示CFPAC-1和PANC-1細(xì)胞經(jīng)Wnt
6、2重組蛋白培養(yǎng)6小時(shí)后,Vimentin蛋白表達(dá)水平增加;E-cadherin只在Wnt2重組蛋白培養(yǎng)的CFPAC-1細(xì)胞中表達(dá)水平降低。PANC-1細(xì)胞干擾 Wnt2組,Vimentin蛋白表達(dá)水平較對(duì)照組降低,E-cadherin蛋白表達(dá)水平升高;PANC-1細(xì)胞過表達(dá) Wnt2組,E-Cadherin、Vimentin蛋白表達(dá)水平均降低。4.激活的星形細(xì)胞及其培養(yǎng)液中可見Wnt2蛋白,星形細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)胰腺癌細(xì)胞增殖速度加快(P<
7、0.05);細(xì)胞遷移(P<0.05)及侵襲能力增強(qiáng)(P<0.05);細(xì)胞核內(nèi)β-catenin增多。
結(jié)論:
1. Wnt2蛋白在胰腺癌間質(zhì)細(xì)胞表達(dá)陽性與預(yù)后相關(guān);患者間質(zhì)染色評(píng)分越高,生存期越短。
2. PANC-1和CFPAC-1胰腺癌細(xì)胞株過表達(dá)Wnt2、Wnt2重組蛋白培養(yǎng)均能使細(xì)胞增殖能力增加;反之,降低 Wnt2的表達(dá)則會(huì)抑制細(xì)胞增殖;Wnt2重組蛋白培養(yǎng)可增強(qiáng)胰腺癌細(xì)胞遷移和侵襲能力;但干擾及
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