胰腺癌中OCT4、PTTG1、TAGLN2的表達(dá)及TGF-β信號通路對TAGLN2在胰腺癌轉(zhuǎn)移中的作用.pdf

1、胰腺癌（Pancreatic carcinoma)的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢，因其惡性程度高，是目前預(yù)后最差的消化道腫瘤。盡管醫(yī)療診斷水平不斷提高，手術(shù)技術(shù)不斷改進(jìn)及腫瘤靶向藥物治療不斷發(fā)展，但胰腺癌的治療效果并沒有明顯改善，5年生存率沒有明顯提高。因此，進(jìn)一步探索胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展、增殖、侵襲轉(zhuǎn)移機(jī)制、尋找新的診斷標(biāo)記物和治療靶點(diǎn)是提高胰腺癌治療療效的關(guān)鍵。
　　目的：
　　1.探討OCT4在胰腺癌組織和癌旁組織（距癌

2、邊緣≥2cm）中的表達(dá)和臨床病理特征之間的關(guān)系以及OCT4與胰腺癌細(xì)胞的增殖、分化和侵襲的關(guān)系；
　　2.研究PTTG1蛋白在胰腺癌組織和癌旁組織（距癌邊緣≥2cm）中的表達(dá)及其與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系；
　　3.研究TGF-β1和TAGLN2蛋白在胰腺癌組織和癌旁組織（距癌邊緣≥2cm）中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系和二者之間的相關(guān)性；探討維漢民族胰腺癌中TGF-β1和TAGLN2蛋白表達(dá)的差異。
　　方法：

3、r>　　1.應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法半定量檢測人胰腺癌的組織芯片中OCT4表達(dá)水平；應(yīng)用Real-time PCR方法定量檢測OCT4和AKT mRNA在胰腺癌細(xì)胞上的表達(dá)水平，用2-△△Ct方法計(jì)算AKT mRNA的表達(dá)；Western blot試驗(yàn)定量檢測胰腺癌組織中OCT4蛋白表達(dá)；并應(yīng)用MTT法檢測感染Lv-shOCT4的細(xì)胞的增殖能力、碳酸脂膜侵襲實(shí)驗(yàn)測定感染Lv-shOCT4的細(xì)胞的侵襲能力。
　　2.應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法

4、檢測胰腺癌組織中PTTG1蛋白的表達(dá)；并對PTTG1蛋白表達(dá)水平與患者的臨床病理特征關(guān)系進(jìn)行分析。
　　3．應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測106例石蠟包埋切片胰腺癌組織中TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的表達(dá)；對TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征進(jìn)行分析；對其中46例液氮冷凍的新鮮組織標(biāo)本-80℃冰箱保存的胰腺癌組織、癌旁組織標(biāo)本應(yīng)用Western blot方法檢測TAGLN2、TβRII

5、、p-Smad2/3的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　第一部分：
　　(1)OCT4在胰腺癌組織和癌旁組織主要位于細(xì)胞核中，胰腺癌組織中的表達(dá)強(qiáng)于癌周組織，兩者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；
　　(2)應(yīng)用Real-time PCR和Western blot assays檢測不同分化程度胰腺癌細(xì)胞(Bxpc3, Panc-1和Mia PaCa-2)中OCT4的表達(dá)，在Panc-1細(xì)胞中OCT4的表達(dá)顯著高于其他兩型細(xì)胞

6、中；
　　(3)OCT4表達(dá)與胰腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系中，與腫瘤的分化程度相關(guān)（P＜0.05），與腫瘤大小、部位、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、年齡、性別無關(guān)（P＞0.05）；
　?。?）胰腺癌Panc-1細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染成Lv-shOCT4后,應(yīng)用Real-time PCR和Western blot試驗(yàn)檢測OCT4和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的mRNA和蛋白表達(dá)水平。與NC和CON組相比，在Lv-shOCT4組中OCT4和AKT的表達(dá)明顯下降(P<

7、0.01,每組)；
　　（5）胰腺癌Panc-1細(xì)胞經(jīng)轉(zhuǎn)染成Lv-shOCT4后,使用MTT法連續(xù)3天檢測細(xì)胞增殖能力；發(fā)現(xiàn)與NC和CON組比較，Lv-shOCT4組中OCT4以時(shí)間依賴的方式明顯抑制了Panc-1細(xì)胞的增殖活力(P<0.01)；
　?。?）通過Transwell實(shí)驗(yàn)，與NC和CON組比較，Lv-shOCT4組Panc-1細(xì)胞的侵襲潛能明顯減弱(P<0.01)，OCT4具有下調(diào)細(xì)胞侵襲能力的作用。
　　

8、第二部分：
　?。?）胰腺癌組織中和癌旁組織中PTTG1蛋白主要在細(xì)胞質(zhì)中有不同程度的陽性表達(dá)，胰腺癌組織明顯強(qiáng)于癌旁組織，兩者間有差異性（P＜0.05）；
　　（2） PTTG1表達(dá)與胰腺癌患者的性別有相關(guān)性，與腫瘤的分化程度、大小、位置、患者年齡、臨床分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無相關(guān)性（P＞0.05）。
　　第三部分：
　?。?）胰腺癌組織中TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的染色主要位于細(xì)胞質(zhì)中，癌組織表達(dá)強(qiáng)

9、于癌旁組織,兩者間差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；
　?。?）免疫組化顯示，胰腺癌組織中TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3的蛋白表達(dá)與腫瘤組織分化程度、神經(jīng)侵潤、腫瘤分期有關(guān)（P＜0.05）；TβRII、p-Smad2/3的蛋白表達(dá)還與腫瘤遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)；
　?。?）Western-blot驗(yàn)證了癌組織TAGLN2、TβRII、p-Smad2/3蛋白表達(dá)水平與腫瘤組織分化程度、神經(jīng)侵潤、腫瘤分期有關(guān)（P＜0.05）

10、；
　　（4）并且胰腺癌組織中TAGLN2與TβRII、p-Smad2/3蛋白表達(dá)均具有正相關(guān)性；
　　（5）維漢民族胰腺癌組織中膠轉(zhuǎn)蛋白2、TβRII和p-Smad2/3表達(dá)無差異（P＞0.05）；
　　結(jié)論：
　　第一部分：
　?。?）OCT4在胰腺癌中的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度有關(guān)，與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移于否無關(guān)；下調(diào)OCT4表達(dá)，可抑制胰腺癌細(xì)胞的增殖、分化和侵襲性；
　?。?） OCT4可

11、能通過AKT信號傳導(dǎo)通路影響胰腺癌的發(fā)生發(fā)展；
　　第二部分：
　　PTTG1蛋白在人胰腺癌組織中高表達(dá)，其表達(dá)水平與胰腺癌患者的性別有關(guān)，與腫瘤位置、大小、分化程度、神經(jīng)浸潤、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、年齡無關(guān)。
　　第三部分：
　?。?）TβRII、p-Smad2/3、TAGLN2在胰腺癌組織中存在蛋白的高表達(dá)；
　　（2）TβRII、p-Smad2/3、TAGLN2與胰腺癌的局部侵犯、腫瘤分化程度、腫瘤分期相關(guān)，與維