Ezrin在胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用及黃芩素對其表達(dá)的影響.pdf

1、目的：探討Ezrin在胰腺癌組織中的表達(dá)及其在胰腺癌惡性進(jìn)展中的作用。并通過觀察黃芩素對PANC-1細(xì)胞Ezrin表達(dá)的影響，探討黃芩素抗腫瘤作用的可能機(jī)制。 方法：收集1997年2月～2005年9月中南大學(xué)湘雅醫(yī)院和河南大學(xué)淮河醫(yī)院手術(shù)切除的46例胰腺癌石蠟包埋組織標(biāo)本及同期其他手術(shù)切除的13例正常胰腺石蠟包埋組織標(biāo)本，運(yùn)用免疫組織化學(xué)染色(SABC)方法觀察Ezrin在胰腺癌組織的表達(dá)情況，并分析其表達(dá)與胰腺癌臨床病理因素和

2、預(yù)后的關(guān)系。 體外培養(yǎng)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞，通過化學(xué)合成的小干擾RNA(siRNA)下調(diào)人胰腺癌PANC-1細(xì)胞Ezrin表達(dá)后，運(yùn)用MTT法、流式細(xì)胞儀、劃痕愈合實(shí)驗(yàn)(Wound healing assay)、掃描電鏡和侵襲小室實(shí)驗(yàn)(Transwell assay)等方法，觀察腫瘤細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期、偽足形成、侵襲和遷移能力的改變。并用Western Blot和RT-PCR檢測黃芩素干預(yù)后腫瘤細(xì)胞Ezrin蛋白、磷酸化Ez

3、rin蛋白及EzfinmRNA表達(dá)的變化。 結(jié)果：免疫組織化學(xué)染色顯示胰腺癌組織中Ezrin陽性表達(dá)率為89.1％(41/46)，其中，強(qiáng)陽性表達(dá)率為45.7％(21/46)，正常胰腺組織中Ezrin陽性表達(dá)率為53.8％(7/13)。癌組織中陽性表達(dá)率顯著高于正常胰腺組織(P=0.009，F(xiàn)isher精確檢驗(yàn))。Ezrin強(qiáng)陽性表達(dá)率隨腫瘤分化程度的降低而增高(X2=7.725，P=0.021)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ezrin強(qiáng)陽性

4、表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(X2=3.989，P=0.046)，但其表達(dá)與患者年齡、性別、腫瘤大小、臨床分期無關(guān)。值得注意的是Ezrin在淋巴管或血管癌栓組織中均呈強(qiáng)陽性表達(dá)。Ezrin強(qiáng)陽性表達(dá)組術(shù)后中位生存時間為16個月(9-36個月)，Ezrin呈弱陽性及陰性表達(dá)組術(shù)后中位生存時間為24個月(8～50個月)，經(jīng)log-rank檢驗(yàn)，兩組差異有顯著意義(X2=4.860，P=0.0276)。 Western印跡結(jié)果顯示，E

5、zrin siRNA對Ezrin蛋白表達(dá)水平有顯著的下調(diào)作用。下調(diào)Ezrin蛋白后，PANC-1細(xì)胞增殖明顯被抑制，G2/M期細(xì)胞顯著降低(P<0.05)；同時伴隨著S期細(xì)胞減少，而G0/G1期增加，細(xì)胞偽足形成顯著減少，腫瘤細(xì)胞的運(yùn)動侵襲能力下降，穿過人工基底膜的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，與干擾前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，但未觀察到RNA干擾對細(xì)胞凋亡有影響。 黃芩素對PANC-1細(xì)胞增殖的抑制作用隨時間的延長和藥物濃度的

6、增加，抑制作用逐漸增強(qiáng)，呈明顯的時間和劑量依賴性；WestemBlot和RT-PCR結(jié)果顯示，黃芩素明顯降低Ezrin、磷酸化Ezrin及Ezrin-mRNA在PANC-1細(xì)胞中的表達(dá)，與對照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1、Ezrin在胰腺癌組織中存在過表達(dá)，且其表達(dá)水平與胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后密切相關(guān)，提示Ezrin可以作為反映胰腺癌預(yù)后的一種有價(jià)值的分子標(biāo)志物。 2、siRNA下調(diào)Ezri