整合素連接激酶(ILK)在胰腺癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、腫瘤的形成與發(fā)展是一個(gè)多基因、多步驟、多階段的病理過程，胰腺癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤之一。是預(yù)后非常差的惡性腫瘤。胰腺癌的解剖部位以及早期缺少特異的癥狀使得早期診斷很困難，胰腺癌在早期階段就能入侵周圍組織和轉(zhuǎn)移，并對(duì)化療，放療等常規(guī)治療效果不佳。外科手術(shù)切除成為了可能治愈該疾病的唯一機(jī)會(huì)，但是目前外科手術(shù)僅限于疾病的早期階段，大多數(shù)病人在手術(shù)后會(huì)出現(xiàn)復(fù)發(fā)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移并在短期內(nèi)死亡。研究胰腺癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的機(jī)制已成為目前研究的熱點(diǎn)。而整合素

2、連接激酶(Integrin—Linked Kinase，ILK)作為一種絲/蘇氨酸蛋白激酶是多種致瘤相關(guān)因素的上游交叉點(diǎn)，在細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的粘連中起到分子支架的作用，同時(shí)還參與了多種信號(hào)傳導(dǎo)途徑。在細(xì)胞粘附、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期等多方面影響腫瘤的形成、增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，從而成為近年來的一個(gè)研究熱點(diǎn)。 ILK在正常組織中表達(dá)有限，但在人類神經(jīng)源性腫瘤、胃癌、前列腺癌、卵巢腫瘤、黑色素瘤、結(jié)腸癌，肺癌中整合素鏈接激酶(IL

3、K)表達(dá)明顯增高且表達(dá)量與腫瘤的惡性程度及轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)。目前，關(guān)于整合素鏈接激酶(ILK)與胰腺癌相關(guān)性的研究國(guó)內(nèi)外還少有報(bào)導(dǎo)，為此，本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用免疫組織化學(xué)S-P法和Western blot法，結(jié)合完整的臨床資料，對(duì)胰腺癌及其胰腺正常組織中整合素鏈接激酶(ILK)的表達(dá)情況進(jìn)行研究，并分析整合素鏈接激酶(ILK)與臨床病理因素的關(guān)系，以探討它在胰腺癌中的表達(dá)及意義。 材料與方法: 一、材料 60例胰腺癌及32例正

4、常胰腺組織均來自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院1990～2008年手術(shù)切除存檔蠟塊。組織均經(jīng)10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。10例胰腺癌及其正常組織來自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床醫(yī)院普外科2007年5月～2008年9月手術(shù)切除標(biāo)本。 二、方法 (一)免疫組織化學(xué)染色： 檢測(cè)ILK表達(dá)采用鏈菌素抗生物素蛋白—過氧化物酶免疫組化法(S-P法)。結(jié)果判定：ILK蛋白表達(dá)定位于細(xì)胞漿，光鏡下每張切片選擇3個(gè)高倍視野，每高倍視野計(jì)數(shù)

5、100個(gè)瘤細(xì)胞，由3名病理醫(yī)師獨(dú)立計(jì)數(shù)。細(xì)胞漿和細(xì)胞膜中染色黃色或淡黃色為陽(yáng)性，顯微鏡下觀察細(xì)胞染色比率，染色比率大于30％為陽(yáng)性 (二)Western blot： 檢測(cè)ILK在正常胰腺組織和胰腺癌中的表達(dá)。取新鮮樣品(1—2克)加5倍裂解緩沖液，剪碎、勻漿超聲處理，高速低溫離心提取上清蛋白，電泳，轉(zhuǎn)印，經(jīng)封閉后加相應(yīng)的一抗、二抗及顯色試劑檢測(cè)。結(jié)果判定為轉(zhuǎn)印膜上出現(xiàn)清晰的藍(lán)紫色條帶為陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果用FluorChemV

6、2.0 Stand Alone電泳凝膠分析軟件測(cè)定灰度值作為定量指標(biāo)，來判斷ILK蛋白相對(duì)含量。 三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS for windows10.0軟件，對(duì)Ⅱ K表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系采用X2檢驗(yàn)。將蛋白印跡結(jié)果的灰度值分為胰腺癌組和正常組進(jìn)行配對(duì)t檢驗(yàn)。P<0.05有顯著意義。 結(jié)果: 一．ILK在正常胰腺組織和胰腺癌組織中的表達(dá) 在正常的胰腺組織中ILK呈陰性表達(dá)，在胰腺癌組織中I

7、LK呈陽(yáng)性表達(dá)． Western Blot結(jié)果顯示：ILK在胰腺癌和正常組織中有不同程度的表達(dá)，在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯高于相應(yīng)的胰腺正常組織。 二．ILK的表達(dá)與胰腺癌的臨床病理因素的關(guān)系 胰腺癌中，ILK陽(yáng)性率為65％(39/60)，其表達(dá)與腫瘤的臨床分期(P<0.05)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.05)相關(guān)，與分化程度無關(guān)(P>0.05)。 結(jié)論: 一．ILK在胰腺癌組織中的表達(dá)明顯高于正常胰腺