TNIK在胰腺癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義.pdf

1、分類號：R6575密級：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位囤專業(yè)學(xué)位口◇學(xué)校代碼：10062學(xué)號：2011601126學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又滓眚科矢號Illl羹NIIN脯耋DIl：I吐0Hl垤I噶11N博士學(xué)位論文DOCToRALDISSERTATIoN論文題目：TNIK在胰腺癌中的表達(dá)及生物學(xué)意義TITLETheexpressionandbiologicalsignificanceofTNIKinpancreaticcancer一級學(xué)科：中西醫(yī)結(jié)合二級學(xué)科

2、：中西醫(yī)結(jié)合臨床微創(chuàng)外科論文作者：張勇指導(dǎo)教師：秦鳴放教授天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二零一四年五月天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要背景：胰腺癌是一種相對罕見、惡性程度極高的消化系統(tǒng)腫瘤。由于解剖位置特殊，臨床發(fā)病隱匿，大多數(shù)患者就診時已屬晚期，而失去手術(shù)機(jī)會，僅10～20％的病人能接受手術(shù)治療，5年生存率僅為67％，而即使行根治性手術(shù)，其術(shù)后5年生存率也只能達(dá)到15～25％。因此，在基因分子水平尋找腫瘤標(biāo)志物，對于胰腺癌預(yù)防、診斷、治療及預(yù)后

3、判斷具有重要意義。既往研究表明，TNIK屬MAP4K家族成員之一，是MAPK信號通路的上游因子，其活化后依次級聯(lián)激活下游底物，通過JNK、Wnt／pcatenin和P13K／Akt信號通路發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖、侵襲，抑制凋亡等作用，與多種腫瘤如結(jié)直腸癌、胃癌以及乳腺癌發(fā)病有關(guān)，但目前尚無TNIK在胰腺癌發(fā)病過程中作用的文獻(xiàn)報道。目的：1、明確TNIK在胰腺癌及其相應(yīng)癌旁組織的表達(dá)，以及TNIK表達(dá)與胰腺癌各臨床病理特征和生存預(yù)后的關(guān)系。2、

4、篩選TNIK表達(dá)水平最高的胰腺癌細(xì)胞系，以及靶向TNIK的有效SiRNA序列。3、研究TNIK對胰腺癌細(xì)胞增值、侵襲、遷移及凋亡等生物學(xué)活性的影響，為臨床以TNIK為靶點的胰腺癌治療提供理論依據(jù)。方法：1、以qPCR和Westernblot法檢測lO對胰腺癌組織及相應(yīng)癌旁組織中TNIK在mRNA和蛋白水平的表達(dá)差異，再以免疫組化法檢測91例石蠟包埋胰腺癌組織中TNIK的表達(dá)水平，以探討TNIK表達(dá)與各臨床病理特征和生存預(yù)后的關(guān)系。2、以

5、qPCR和Westernblot法檢測AsPC1、BxPC。3、MiaPaca一2和Panc1四種胰腺癌細(xì)胞系中TNIK在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，篩選出TNIK表達(dá)水平最高的胰腺癌細(xì)胞系，再以靶向TNIK的SiRNA1、SiRNA2、SiRNA一3以及陰性對照(NC)、陽性對照(PC)以及空載體(Vector)，在陽離子脂質(zhì)體LipofectamineTM2000介導(dǎo)下分別轉(zhuǎn)染該細(xì)胞系，篩選出干擾效率最明顯的SiRNA。3、以干擾效率

6、最高的SiRNA、NC和Vector分別轉(zhuǎn)染TNIK表達(dá)水平最高的胰腺癌細(xì)胞系，再以MTT法、Transwell法、劃痕愈合實驗及AnnexinVFITCPI熒光雙標(biāo)記法檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞增殖、侵襲、遷移及凋亡等生物學(xué)活性的改變，以明確TNIK在胰腺癌發(fā)病過程中的作用。結(jié)果：1、與癌旁組織相比，胰腺癌組織中TNIK在mRNA和蛋白水平表達(dá)顯著增高(P=0028，PO01)；晚期胰腺癌(IIIIIIV期)TNIK高表達(dá)率554％顯著高于其早期