整合素連接激酶在非小細胞肺癌中的表達及意義.pdf

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文整合素連接激酶在非小細胞肺癌中的表達及意義姓名：余輝申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：張道榮2004030121采用鏈菌素抗生物素蛋白一過氧化物酶免疫組化法(S—P法)，檢測101例非小細胞肺癌組織，相應正常肺組織的石蠟標本中nK蛋白的表達。結果判定：每張切片在光鏡下隨機選取5個高倍視野。觀察陽性細胞染色強度；無染色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。0分為陰性，1分為弱陽性，2分為

2、陽性，3分為強陽性。22免疫印跡法：取在深凍冰箱中凍存的肺癌及正常的肺組織O125cm3大小各一塊復融后分別加入預冷并含蛋白酶抑制劑的裂解緩沖液500ul，勻漿，超聲振蕩破碎細胞，混懸冰上靜置30mln后離心(10，000r／min，30nn)取上清，用酚試劑法測蛋白質濃度。用含SDS的樣品緩沖液調整各樣品總蛋白濃度為3mg／ml，100℃加熱5min后上樣，每泳道加樣品20ug。采用10％SDS—PAGE凝膠電泳，50V電壓下—個半小

3、時，根據(jù)m8矗一er位置，切取相應的凝膠，電轉膜后將PYDF膜與一抗雜交，4℃孵育過夜(I％BSA將ILK一抗稀釋成2ug／m1)。二抗為堿性磷酸酶標記的兔抗鼠免疫血清(1％BSAI：1000稀釋)，室溫孵育二小時，BCIP／NBT顯色3—5min。結果判定：在glla_rked“的60Kda附近出現(xiàn)的特異性條帶，用計算機圖像分析系統(tǒng)測定灰度值，來判斷ILK蛋白相對含量。3統(tǒng)計學處理：采用SPsSforwindows100軟件，，用K丑

4、p】【an—Meiea法進行生存數(shù)據(jù)的分析，Log一刪Ill‘檢驗差異性，用Cox模型進行多因素分析。對扣醫(yī)表達與臨床病理特征的關系采用X2檢驗。將蛋白印跡結果的灰度值分為肺癌組和正常組進行配對t檢驗。PO05有顯著意義。實驗結果1免疫組織化學結果11ILK陽性染色定位及不同部位表達情況ILK在平滑肌細胞和纖維母細胞胞漿中呈陽性或強陽性表達，但我們在結果判定時并未把問質的表達(無論正常組織或癌組織)計算在內。在正常的支氣管粘膜上皮，Ⅱ型