β3整合素在骨轉(zhuǎn)移小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、研究背景：在全世界范圍內(nèi)肺癌已成為惡性腫瘤相關(guān)性死亡的主要原因，其發(fā)病率在許多國家呈逐年上升趨勢[1]。在晚期肺癌患者中，骨轉(zhuǎn)移是常見的轉(zhuǎn)移形式。研究表明，大于35％的晚期肺癌患者出現(xiàn)骨轉(zhuǎn)移，而在尸檢中高達(dá)50％的肺癌患者存在骨轉(zhuǎn)移[2]。骨轉(zhuǎn)移作為肺癌嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，它可引起疼痛、病理性骨折、脊髓壓迫、高鈣血癥等癥狀[3]。目前臨床治療骨轉(zhuǎn)移還僅限于姑息性治療。因此，深入研究骨轉(zhuǎn)移的機制，探討新的預(yù)防和治療骨轉(zhuǎn)移的方法顯得尤為重要。

2、許多前期臨床試驗結(jié)果顯示，β3整合素的拮抗劑能夠阻止腫瘤在骨內(nèi)生長和抑制乳腺癌細(xì)胞引起的骨質(zhì)吸收[4-6]，這就表明β3整合素可能成為抑制骨轉(zhuǎn)移的治療靶點。
　　目的：盡管有實驗提示β3整合素在某些腫瘤骨轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著很重要的作用，但是它在人小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用仍然未被揭示。本研究通過對具有高骨轉(zhuǎn)移特性的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株SBC-5和無骨轉(zhuǎn)移特性的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株SBC-3[7]進(jìn)行比較，分析兩者之間β3整合素的差異性及其意義

3、，探討β3整合素在小細(xì)胞肺癌骨轉(zhuǎn)移中的作用及機制。
　　方法：首先應(yīng)用RT-PCR、Westernblotting和免疫熒光染色方法檢測兩株細(xì)胞株中β3整合素的表達(dá)情況。然后利用干擾技術(shù)，使高表達(dá)β3整合素的SBC-5細(xì)胞株中β3整合素基因沉默，進(jìn)而應(yīng)用MTT實驗、軟瓊脂形成實驗、細(xì)胞凋亡檢測、黏附實驗、遷移及侵襲實驗等探究β3整合素在高骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中的作用。
　　結(jié)果：（1）不同骨轉(zhuǎn)移特性的人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株中β3整合素的

4、表達(dá)：RT-PCR和Westernblotting結(jié)果顯示，SBC-5細(xì)胞株中β3整合素mRNA含量和蛋白的表達(dá)均高于SBC-3細(xì)胞株；免疫熒光結(jié)果顯示，SBC-5細(xì)胞株細(xì)胞膜表面出現(xiàn)大量綠色熒光，而SBC-3細(xì)胞株卻僅有少量綠色熒光。（2）β3整合素在腫瘤增殖和轉(zhuǎn)移中的作用：MTT實驗結(jié)果顯示，沉默β3整合素基因的SBC-5細(xì)胞株的增殖能力明顯低于對照組（P<0.01）；克隆形成實驗結(jié)果顯示，沉默β3整合素基因的SBC-5細(xì)胞株形成的

5、克隆數(shù)明顯少于對照組(P<0.05)；細(xì)胞凋亡實驗結(jié)果顯示，沉默β3整合素基因的SBC-5細(xì)胞株的凋亡率顯著高于對照組（P<0.001）；黏附實驗結(jié)果顯示，隨著時間的延長，兩組細(xì)胞黏附的細(xì)胞數(shù)量增多，沉默β3整合素基因的SBC-5細(xì)胞株在每個觀察時間點上黏附細(xì)胞數(shù)均少于對照組；遷移實驗結(jié)果顯示，沉默β3整合素基因的SBC-5細(xì)胞株遷移細(xì)胞數(shù)少于對照組（P<0.001）；侵襲實驗結(jié)果顯示，沉默β3整合素基因的SBC-5細(xì)胞株穿過Matri