MicroRNA-148a對(duì)胰腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討microRNA-148a（miR-148a）對(duì)胰腺癌BxPC-3細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移的影響及其作用機(jī)制。
　　方法：
　?。?）采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）檢測(cè)33例胰腺癌組織中miR-148a的表達(dá)水平，并以其中位值分為低表達(dá)組和高表達(dá)組，分析miR-148a表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系。
　　（2）通過LipofectamineTM2000介導(dǎo)將 miR-148a模擬物（mimic）

2、轉(zhuǎn)染至胰腺癌BxPC-3細(xì)胞，將細(xì)胞分為3組：Blank組（轉(zhuǎn)染Lipofectamine作為空白對(duì)照組），miR-NC組（轉(zhuǎn)染negative mimic作為陰性對(duì)照組），miR-148a mimic組（轉(zhuǎn)染miR-148a mimic作為實(shí)驗(yàn)組）。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后，qPCR檢測(cè)miR-148a表達(dá)水平，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，Western blot檢測(cè)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)記物（E-cadherin、Vimentin和N-cadhe

3、rin）的表達(dá)，Transwell檢測(cè)細(xì)胞的遷移及侵襲能力。
　?。?）熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)驗(yàn)證miR-148a可與Wnt10b3′UTR相結(jié)合；qPCR法檢測(cè)胰腺癌組織中miR-148a與Wnt10b表達(dá)水平，并分析其相關(guān)性；miR-148a mimic/inhabitor轉(zhuǎn)染胰腺癌BxPC-3細(xì)胞，Western blot檢測(cè)Wnt10b蛋白以及Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白（β-catenin、Cyclin D1

4、和MMP-9）表達(dá)。
　　結(jié)果：
　?。?）miR-148a低表達(dá)組與高表達(dá)組的TNM分期、腫瘤大小差異具有顯著性（P＜0.05）。
　?。?）光學(xué)顯微鏡觀察到實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞形態(tài)學(xué)發(fā)生了顯著變化，表現(xiàn)為鋪路石樣上皮細(xì)胞顯著增多，而陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組仍以梭形、成纖維細(xì)胞形態(tài)的間質(zhì)細(xì)胞為主。與兩對(duì)照組相比，miR-148a mimic組上皮標(biāo)記物E-cadherin表達(dá)顯著增高（3.17±0.32 vs.1.00±0.00

5、 vs.1.08±0.17，P＜0.05），而間質(zhì)表型標(biāo)記物Vimentin和N-cadherin表達(dá)則明顯下調(diào)（Vimentin：0.45±0.09 vs.1.00±0.00 vs.0.97±0.12；N-cadherin：0.55±0.03 vs.1.00±0.00 vs.0.94±0.06，均P＜0.05）。同時(shí)，miR-148a mimic組細(xì)胞遷移及侵襲能力顯著下降（遷移實(shí)驗(yàn)：265±53 vs.256±48 vs.83±23

6、；侵襲實(shí)驗(yàn)：108±20 vs.103±13 vs.33±11，均P＜0.001）。
　?。?）雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)證實(shí)miR-148a可與Wnt10b3′UTR相結(jié)合；上調(diào)胰腺癌 BxPC-3細(xì)胞 miR-148a的表達(dá)能顯著抑制 Wnt10b的表達(dá)（1.00±0.00 vs.1.03±0.08 vs.0.17±0.02，P＜0.05），而下調(diào)miR-148a表達(dá)能顯著上調(diào)Wnt10b表達(dá)（1.00±0.00 vs.1.12±

7、0.19 vs.2.57±0.31，P＜0.05）。胰腺癌組織中Wnt10b和miR-148a的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)性（r=-0.2635，P＜0.01）。以上結(jié)果表明胰腺癌中 Wnt10b是 miR-148a的直接作用靶基因。上調(diào)胰腺癌BxPC-3細(xì)胞miR-148a的表達(dá)能顯著下調(diào)Wnt/β-catenin信號(hào)通路相關(guān)蛋白（β-catenin、Cyclin D1和MMP-9）的表達(dá)（β-catenin：1.00±0.00 vs.1.09

8、±0.11 vs.0.27±0.05；Cyclin D1：1.00±0.00 vs.0.96±0.07 vs.0.19±0.03；MMP-9：1.00±0.00 vs.1.13±0.10 vs.0.26±0.03，均P＜0.05）。
　　結(jié)論：
　　miR-148a在胰腺癌組織中的表達(dá)與TNM分期和腫瘤大小有關(guān)。上調(diào)miR-148a可抑制胰腺癌 BxPC-3細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移，其作用機(jī)制與miR-148a靶向抑制Wn