NF-κB對人結(jié)腸癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及侵襲轉(zhuǎn)移的影響.pdf

1、目的:調(diào)節(jié)人結(jié)腸癌細胞株HCT116的NF-κB的表達，觀察NF-κB的表達變化對結(jié)腸癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)、侵襲及轉(zhuǎn)移能力的影響，初步探究NF-κB與結(jié)腸癌細胞EMT、侵襲轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系及其可能涉及的機制。
　　方法:將人結(jié)腸癌細胞HCT116分為三個實驗組，包括NF-κB活化組，NF-κB抑制組和空白對照組;根據(jù)文獻及預實驗結(jié)果，以上三組分別用終濃度為20 ng/ml的NF-κB活化激活劑TNF-α、終濃度為20μmol

2、/l的NF-κB活化抑制劑PDTC干預HCT116細胞4天;應用MTT法檢測細胞增殖活性;采用倒置相差顯微鏡觀察細胞形態(tài)變化;應用Transwell小室模型進行細胞侵襲、遷移實驗;采用免疫印跡法(Western Blotting)檢測各組細胞p65、P-p65、E-cadherin和N-cadherin的蛋白水平的表達情況;應用熒光定量PCR檢測各組細胞中E-cadherin與N-cadherin的mRNA表達水平。
　　結(jié)果:細

3、胞增殖實驗顯示TNF-α促進HCT116細胞的生長增殖，PDTC則抑制細胞的生長增殖，且隨著時間的推移，促進或者抑制的現(xiàn)象更為明顯。形態(tài)學上，TNF-α組的HCT116細胞發(fā)生了明顯的EMT形態(tài)變化，表現(xiàn)在細胞變?yōu)榧忓N狀，細胞結(jié)構(gòu)較為松散，出現(xiàn)了較多明顯的細長絲狀偽足;PDTC組的EMT形態(tài)則被抑制，表現(xiàn)為偽足不明顯，細胞成多角形并緊密排列。Transwell小室侵襲實驗結(jié)果中，各組穿過上室的細胞數(shù)分別為:TNF-α組(118.50±1

4、.95)、對照組(97.75±3.77)、PDTC組(51.00±1.83);遷移實驗結(jié)果中，穿過上室的細胞數(shù)分別為:TNF-α組(167.00±6.36)、對照組(140.00±4.32)、PDTC組(80.00±2.53);綜上，TNF-α組細胞的侵襲遷移能力高于對照組(P＜0.05)，而PDTC組細胞的侵襲遷移能力低于對照組(P＜0.05)。免疫印跡WB結(jié)果顯示，TNF-α組、對照組、PDTC組的p65表達無明顯差異(P＞0.05

5、);P-p65的蛋白表達結(jié)果為，TNF-α組(0.72±0.04)高于對照組(0.42±0.01)(P＜0.05)，PDTC組(0.12±0.01)則低于對照組（0.42±0.01）(P＜0.05);E-cadherin的蛋白表達結(jié)果為，TNF-α組(0.15±0.01)低于對照組(0.42±0.03)(P＜0.05)，PDTC組(0.56±0.06)則高于對照組(0.42±0.03)(P＜0.05）;N-caherin的蛋白表達結(jié)果顯

6、示，TNF-α組(0.33±0.01)高于對照組(0.29±0.01)(P＜0.05)，PDTC組(0.09±0.01)則低于對照組(0.29±0.01)(P＜0.05)。熒光定量PCR檢測各組細胞的mRNA結(jié)果顯示，N-cadherin mRNA的表達結(jié)果為，TNF-α組(3.90±0.47)高于對照組(1.00±0.00)，PDTC組(0.08±0.02)則低于對照組(1.00±0.00)(均P＜0.05); E-cadherin