microRNA-200c調(diào)控上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細胞對吉非替尼抵抗的機制研究.pdf

1、背景：
　　結(jié)腸癌是人類最常見的消化道惡性腫瘤之一，其發(fā)病率呈明顯上升趨勢。目前臨床治療上以手術(shù)和化療為主。此外，針對表皮生長因子受體（EGFR）家族的靶向治療藥物（如吉非替尼）也已應(yīng)用于臨床多年。盡管多項臨床前研究均已證實吉非替尼較好的抗腫瘤活性，進一步的臨床研究卻發(fā)現(xiàn)，有較高比例患者對該類治療存在原發(fā)或繼發(fā)性耐受。因此，為預(yù)測患者對治療的敏感性，選擇可受益患者接受治療，有必要進一步探討吉非替尼的耐受機制。近年研究發(fā)現(xiàn)在膀胱癌及

2、非小細胞肺癌中，microRNA-200c及上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）與EGFR抑制劑療效敏感性之間具有密切聯(lián)系。
　　目的：探討結(jié)腸癌細胞中microRNA-200c及EMT表型與EGFR抑制劑療效敏感性間的關(guān)系
　　方法：
　　1. qRT-PCR法、western blot法檢測四株結(jié)腸癌細胞中EMT相關(guān)基因表達情況。
　　2. qRT-PCR法檢測四株結(jié)腸癌細胞中microRNA-200c表達水平
　　

3、3. CCK-8法檢測四株結(jié)腸癌細胞對吉非替尼的藥物敏感性。
　　4.外源性上調(diào)或下調(diào) microRNA-200c表達，觀察 EMT相關(guān)基因表達變化
　　5.外源性上調(diào)或下調(diào)microRNA-200c表達，觀察其對吉非替尼敏感性的影響。
　　結(jié)果：
　　1.四株結(jié)腸癌細胞系之間存在明顯的EMT表型差異，HT29細胞中E-cadherin表達量最高，vimentin及ZEB1表達缺失，HCT116及SW480細胞中

4、E-cadherin表達量依次降低，SW620細胞中E-cadherin表達量最低，且間質(zhì)細胞表型標志分子vimentin及ZEB1呈高表達。
　　2. microRNA-200c在HT29中表達量最高，在HCT116和SW480中表達較高但均低于HT29中表達量，在SW620中表達水平極低。
　　3. HT29對吉非替尼最為敏感，HCT116和SW480為中度敏感；而SW620對吉非替尼相對不敏感。
　　4.在HT2

5、9細胞中下調(diào)microRNA-200c表達后，ZEB1 mRNA表達水平明顯上調(diào)（蛋白水平表達極低，轉(zhuǎn)染前后均檢測不出），E-cadherin表達明顯下調(diào)，vimentin表達明顯上調(diào)；SW620細胞中過表達microRNA-200c后，ZEB1明顯下調(diào)，E-cadherin明顯上調(diào)，vimentin明顯下調(diào)。
　　5.在 HT29細胞中下調(diào) microRNA-200c表達后，其對吉非替尼敏感性明顯降低；而上調(diào) microRNA-