常山酮逆轉(zhuǎn)放射治療導(dǎo)致Lewis肺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究.pdf

1、目的:研究常山酮對(duì)放射治療所致Lewis肺癌細(xì)胞(LLC)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)的逆轉(zhuǎn)作用，并探討TGF-β信號(hào)通路在此過程中作用。
　　方法:將LLC細(xì)胞系分為以下5組，空白對(duì)照組:不做任何處理;單純常山酮組:給予常山酮濃度為30ng/ml的全培養(yǎng)基培養(yǎng);單純放射治療組:給予10Gy劑量的6MV-X線單次照射;放射治療聯(lián)合常山酮組:給予常山酮濃度為30ng/ml的全培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后再給予10Gy劑量的放射治療;放射治療聯(lián)合抑制

2、劑組:給予含恒定濃度TGF-β信號(hào)通路抑制劑(SB431542)的全培養(yǎng)基培養(yǎng)24h后再給予10Gy劑量的放射治療。分別應(yīng)用ELISA、免疫熒光、Western Blot、RT-PCR等技術(shù)，研究不同處理后LLC細(xì)胞系TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路的變化及其對(duì)LLC細(xì)胞EMT生物指標(biāo)的影響，并采用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)以及Transwell侵襲轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同處理后細(xì)胞遷移和侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:本研究通過MTT實(shí)驗(yàn)最終選定TGF-β抑制劑S

3、B431542的濃度為40ug/ml。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，放射治療后LLC細(xì)胞培養(yǎng)基中TGF-β水平較放射治療前升高，且放射治療后3h、6h、12h、24h時(shí)TGF-β升高水平與放射治療前相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。各處理組以開始接受放射治療時(shí)的時(shí)間點(diǎn)為基線，放療后6h時(shí)，單純常山酮組TGF-β水平較空白對(duì)照組明顯降低(P＜0.05），單純放射治療組TGF-β水平較空白對(duì)照組明顯升高（P＜0.05），而放射治療聯(lián)合常山

4、酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組較單純放射治療組TGF-β水平均明顯降低(P＜0.05）。免疫熒光結(jié)果顯示，單純放射治療后上皮標(biāo)志物Cytokeratin的表達(dá)較空白對(duì)照組減少，而單純常山酮組Cytokeratin的表達(dá)較空白對(duì)照組升高，放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組Cytokeratin的表達(dá)較單純放射治療組增加;單純放射治療組間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin的表達(dá)較空白對(duì)照組增多，單純常山酮組Vimentin的表達(dá)較空白對(duì)照組減少，

5、而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組Vimentin的表達(dá)較單純放射治療組減少。Western Blot結(jié)果顯示，單純放射治療組p-Smad2蛋白的表達(dá)較空白對(duì)照組升高，而單純常山酮組p-Smad2蛋白的表達(dá)較對(duì)照組降低，放射治療聯(lián)合常山酮組p-Smad2的表達(dá)水平較單純放射治療組下降;同樣，不同處理組之間Smad6蛋白的表達(dá)水平亦不相同，單純放射治療組Smad6表達(dá)較對(duì)照下降，單純常山酮組Smad6表達(dá)水平較對(duì)照組增加，放射治

6、療聯(lián)合常山酮組Smad6表達(dá)較單純放射治療組亦增加。RT-PCR結(jié)果顯示，放射治療組Twist和Snail基因表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高，單純常山酮組Twist和Snail基因表達(dá)水平較對(duì)照組明顯降低;而放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合抑制劑組Twist和Snail基因表達(dá)水平較單純放射治療組降低。細(xì)胞劃痕以及Transwell侵襲轉(zhuǎn)移結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組相比，單純常山酮組劃痕傷口愈合面積減少，Transwell小室穿膜細(xì)胞數(shù)明顯減少

7、(P＜0.05）;單純放射治療組劃痕傷口愈合面積明顯增多，Transwell小室穿膜細(xì)胞數(shù)增多（P＜0.05);與單純放射治療組相比，放射治療聯(lián)合常山酮組以及放射治療聯(lián)合抑制劑組劃痕傷口愈合面積減少，Transwell小室穿膜細(xì)胞數(shù)亦明顯減少（P＜0.05）。
　　結(jié)論:放射治療可能是通過激活TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路引起LLC細(xì)胞發(fā)生EMT;常山酮可以抑制放射治療所致的腫瘤細(xì)胞EMT，其作用機(jī)制可能是通過抑制TGF-β信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的