常山酮抑制放療導(dǎo)致Lewis肺癌細(xì)胞小鼠移植瘤上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討應(yīng)用常山酮阻斷轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）信號(hào)傳導(dǎo)通路,并觀察其與腫瘤的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）的相關(guān)性。
　　方法：建立腫瘤移植瘤動(dòng)物模型，挑選80只腫瘤負(fù)荷相近的小鼠隨機(jī)分為五組，分別為空白對(duì)照組（NC）、常山酮組、放射治療組（RT）、常山酮聯(lián)合放射治療組，以及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組，每組16只。當(dāng)移植瘤最大徑長(zhǎng)至0.8cm時(shí)，作為實(shí)驗(yàn)的第1天。對(duì)照組不做處理；常山酮組予常山酮灌胃給藥，每只鼠30μg/0.2

2、ml/d，連續(xù)一個(gè)月或至處死；放射治療組于第3天、4天給予移植瘤6MV-X線照射，放射治療劑量為10Gy×2；放射治療聯(lián)合常山酮組給藥處理同常山酮組，放射治療的時(shí)間及劑量同放射治療組；放射治療聯(lián)合抑制劑組于第1天開始予TGF-β抑制劑（SB431542終濃度1μM）灌胃給藥，每只小鼠0.1ml/d，連續(xù)一個(gè)月或至處死，放射治療處理同放射治療組。分別應(yīng)用ELISA、Western Blot、免疫組化及免疫熒光等技術(shù)，研究各組Lewis肺癌

3、（LLC)細(xì)胞系TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)通路的變化及其對(duì)EMT生物指標(biāo)的影響。
　　結(jié)果：ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，放射治療后小鼠移植瘤LLC細(xì)胞中TGF-β水平較放射治療前升高，且放療后10天、14天時(shí)TGF-β所出現(xiàn)的變化和進(jìn)行治療之前對(duì)比而言，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：?jiǎn)渭兎派渲委熃M腫瘤組織中可見大量黃色染色區(qū)域，TGF-β呈陽性表達(dá)。單純放射治療組 TGF-β水平較空白對(duì)照組明顯升高(P<0.05)

4、，而放射治療聯(lián)合常山酮組TGF-β水平明顯低于單純放射治療組(P<0.05)，放射治療聯(lián)合常山酮組及放射治療聯(lián)合TGF-β抑制劑組TGF-β水平無統(tǒng)學(xué)差異(P>0.05)。通過實(shí)驗(yàn)研究確立了照射及常山酮對(duì)TGF-β信號(hào)通路的影響。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，在單純放射治療組中，小鼠的移植瘤中出現(xiàn)的 P-Smad2蛋白表達(dá)水平和空白對(duì)照組進(jìn)行比較來看，有很明顯的上升，而Smad6、7的蛋白表達(dá)情況則出現(xiàn)下降；此外，兩聯(lián)合組小鼠移植瘤內(nèi)的P-Smad2蛋白

5、表達(dá)較單純照射組明顯降低，Smad6、7蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組明顯升高。移植瘤 Western Blot顯示：RT組 E-cadherin表達(dá)降低、N-cadherin、Vimentin表達(dá)升高；兩聯(lián)合組較 RT組 E-cadherin表達(dá)升高， N-cadherin、Vimentin表達(dá)降低。小鼠移植瘤免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：?jiǎn)渭冋丈浣M較空白對(duì)照組E-cadherin表達(dá)降低、N-cadherin表達(dá)升高；兩聯(lián)合組較單純照射組 E-cad