RNA干擾ILK基因對結腸癌細胞侵襲遷移的影響.pdf

1、目的:通過RNA干擾結腸癌細胞ILK基因，逆轉上皮間葉變，促進間充質上皮轉變，探討其對侵襲遷移的影響。
　　 方法:1.設計針對ILK基因shRNA，并構建pGenesil1.2-ILK shRNA重組質粒。培養(yǎng)人結腸癌細胞SW620、SW480和HT29，應用RT-PCR和Western blot檢測三種細胞ILK的mRNA和蛋白表達，篩選三種細胞中表達ILK最高的結腸癌細胞系。2.陽離子脂質體介導pGenesil1.2-IL

2、K shRNA重組質粒轉染至結腸癌細胞，實驗分三組:(1)空白對照組:未轉染細胞組。(2)實驗組:轉染質粒pGenesil1.2-ILKshRNA細胞組;(3)陰性對照組:轉染空質粒pGenesil1.2細胞組。流式細胞術檢測細胞轉染率。應用實時熒光定量PCR和Western blot檢測結腸癌細胞RNA干擾后，ILK mRNA及蛋白水平表達。3.實時熒光定量PCR和Westernblot檢測與細胞上皮間質化有關的E-cadherin和

3、Vimentin的mRNA及蛋白水平表達。4.Transwell小室遷移和侵襲實驗檢測細胞的遷移和侵襲能力。
　　 結果:1.三種結腸癌細胞SW620、SW480和HT29中，SW620的ILK mRNA和蛋白表達水平均高于SW480和HT29，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。篩選出高表達ILK的結腸癌細胞SW620進行下一步實驗。
　　 2.ILK shRNA質粒轉染結腸癌細胞SW62048小時后，熒光定量PCR結

4、果顯示，實驗組ILK mRNA表達水平與對照組相比明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Western blot檢測結果顯示實驗組ILK蛋白表達水平與對照組相比也明顯降低，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 3.ILK shRNA質粒轉染結腸癌細胞SW62048小時后，實驗組E-cadherin mRNA和蛋白表達水平均高于陰性對照組和空白對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。實驗組Vimentin mRN

5、A和蛋白表達水平低于陰性對照組和空白對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4.Transwell遷移實驗示轉染48小時后，實驗組、陰性對照組和空白對照組通過小室膜的細胞數(shù)分別為134.94±4.76、196.76±4.97和203.35±7.31。實驗組穿過小室膜細胞數(shù)明顯低于其它兩組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。Transwell侵襲實驗示細胞轉染48小時后，實驗組、陰性對照組和空白對照組通過Matrige

6、l膠的細胞數(shù)目分別為36.44±3.31、86.8±2.17和88.56±4.02。實驗組通過Matrigel膠細胞數(shù)明顯低于其它兩組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 結論:1、在人結腸癌細胞SW620、SW480和HT29中，結腸癌細胞SW620的ILK表達最高。
　　 2、結腸癌細胞轉染ILK shRNA質粒后，實驗組ILK水平明顯低于對照組，干擾ILK基因可以有效地沉默結腸癌細胞SW620的ILK基因表達