RNA干擾FUT6對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2侵襲遷移的影響.pdf

1、目的:探討針對(duì)α1,3巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶-Ⅵ(α1,3-fucosyltransferase-Ⅵ,FUT6)的小干擾RNA(small interference RNA,siRNA)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染高表達(dá)靶基因的人肝癌細(xì)胞株HepG2,較全面的觀察轉(zhuǎn)染后FUT6基因的沉默對(duì)肝癌細(xì)胞株HepG2生物學(xué)特性的影響,初步探討FUT6基因在肝癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用,對(duì)肝癌FUT6基因治療的可行性提供初步依據(jù)。
　　方法:通過熒光定量PCR(Real

2、-time PCR)檢測3種肝癌細(xì)胞株HuH-7,SMCC-7721和HepG2相比較于正常肝細(xì)胞株HL-7702的α1,3巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶(FUTs)表達(dá)的差異,確定在肝癌細(xì)胞中特異性表達(dá)的α1,3巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶亞型。靶向FUT6的siRNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞株HepG2后,通過western blot檢測FUT6蛋白的表達(dá),通過流式細(xì)胞術(shù)檢測肝癌細(xì)胞表面抗原唾液酸路易斯糖(Sialyl Lewis X,sLeX)表達(dá)情況。Transwell

3、小室方法進(jìn)行細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)檢測肝癌細(xì)胞株HepG2轉(zhuǎn)移和侵襲能力的變化。
　　結(jié)果:以正常肝細(xì)胞株HL-7702的個(gè)基因表達(dá)量為基準(zhǔn),FUT6的基因表達(dá)量在三個(gè)肝癌細(xì)胞株HuH-7,HepG2和SMCC-7721分別是基準(zhǔn)表達(dá)量的25.0,3.8和2.6倍。另外兩個(gè)α1,3巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶:FUT4和 FUT7,分別在 HL-60細(xì)胞株中升高10.8和250.0倍,但是它們?cè)诟伟┘?xì)胞株中是不升高甚至明顯降低。FUT9在HuH-7

4、細(xì)胞株中升高了400.0倍,但在其他肝癌細(xì)胞株HepG2和SMCC-7721中不升高。在HepG2細(xì)胞中FUT6升高是排他性的,選擇在肝癌細(xì)胞株HepG2中研究FUT6。
　　實(shí)驗(yàn)分為3組,分別命名為control(空白對(duì)照組),mock(陰性對(duì)照scrambled-siRNA)和siRNA-FUT6(實(shí)驗(yàn)組)。實(shí)驗(yàn)組FUT6蛋白較空白對(duì)照組降低75.8％,陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組無明顯差異。實(shí)驗(yàn)組sLeX抗原較空白對(duì)照組降低89.