抑制ALCAM基因表達對肝癌HepG2細胞增殖和侵襲的影響.pdf

1、背景：
　　活化白細胞黏附分子（Activated Leukocyte Cell Adhesion Molecule， ALCAM）是免疫球蛋白基因超家族成員，主要表達在白細胞和胸腺上皮細胞。ALCAM為 I型跨膜蛋白，其通過異嗜性黏附形式（ALCAM-CD6）和同嗜性黏附形式（ALCAM-ALCAM）介導細胞間黏附。既往研究表明 ALCAM與腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關，參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。
　　目的：
　　本研究探討

2、 ALCAM表達與肝細胞癌的相關性以及其在肝細胞癌發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　1．RT-PCR及免疫組化方法檢測 ALCAM基因在52例肝細胞癌組織及相應癌旁組織中的表達,分析ALCAM的表達與肝細胞癌臨床病理特征的相關性。
　　2．利用pSES-HUS系統(tǒng)構(gòu)建特異性ALCAM基因的siRNA腺病毒載體pSES-ALCAM-siRNA,測序證實基因序列正確后包裝成腺病毒siRNA并轉(zhuǎn)染肝癌細胞株HepG2，應用

3、RT-PCR和Western blot檢測siRNA對肝癌細胞HepG2中ALCAM基因的干擾效果。
　　3．MTT及流式細胞技術檢測干擾ALCAM表達后HepG2細胞增殖及凋亡情況；Transwell實驗檢測HepG2遷移、侵襲能力改變。
　　結(jié)果：
　　1．RT-PCR結(jié)果顯示與癌旁正常組織相比較，ALCAM在肝細胞癌組織中的高表達（P＜0.01）。免疫組化與臨床資料統(tǒng)計分析進一步證實ALCAM與腫瘤分化程度（P=

4、0.024），肝內(nèi)轉(zhuǎn)移（P=0.019）呈負相關，肝癌組織中 ALCAM異常低表達提示腫瘤分化程度低，易轉(zhuǎn)移；而與患者性別，年齡，術前AFP值，腫瘤直徑及臨床TNM分期無明顯相關性（P＞0.05）。
　　2．構(gòu)建腺病毒pSES-ALCAM-siRNA并轉(zhuǎn)染HepG2，RT-PCR和Western blot顯示ALCAM在基因及蛋白表達水平均被明顯抑制。
　　3．通過siRNA干擾肝癌細胞株HepG2中ALCAM基因表達，MT

5、T及流式細胞術檢測表明干擾ALCAM表達后肝癌細胞株HepG2增殖受到抑制（P＜0.05），凋亡率增加（P＜0.05）；而 Transwell實驗發(fā)現(xiàn)ALCAM干擾后HepG2遷移、侵襲能力上升（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. ALCAM在肝細胞癌組織中的高表達，并且與肝癌分化程度，肝內(nèi)轉(zhuǎn)移有相關性。這些數(shù)據(jù)表明 ALCAM可能作為一個新指標診斷肝癌并且提示腫瘤分化程度及轉(zhuǎn)移風險。
　　2．腺病毒 siRNA成