吉馬酮抑制肝癌HepG2細胞增殖機制研究.pdf

1、莪術為姜科植物蓬莪術,廣西莪術和溫郁金的干燥根莖,具有順血調氣,消腫止痛的功能,而吉馬酮則為莪術揮發(fā)油中主要的活性成分。經研究報道,莪術揮發(fā)油具有良好的抗腫瘤、抗炎、抗病毒作用,并且有研究表明吉馬酮具有顯著抑癌效果,但尚未對其抗癌作用機制展開深入研究。本文以肝癌HepG2細胞作為研究材料,通過Westernblotting,RT-PCR,以及流式細胞檢測等方法研究吉馬酮對HepG2細胞的增殖影響,主要研究結果有以下幾個方面:
　　

2、(1)吉馬酮劑量和時間依賴性地抑制肝癌HepG2細胞增殖。通過MTT比色法進行測定,其結果表明吉馬酮能夠顯著抑制HepG2細胞的增殖,并且藥物濃度越高,時間作用越長,其抑制效果越明顯。當濃度高于160μM時,其細胞抑制效果無明顯統(tǒng)計學差異。藥物處理48小時與處理24小時相比,沒有呈現(xiàn)時間依賴性。
　　(2)吉馬酮對HepG2細胞處理后呈現(xiàn)G2/M期周期阻滯。不同濃度吉馬酮處理肝癌HepG2細胞后,進行PI單染,通過流式細胞儀檢測細

3、胞周期后呈現(xiàn)G2/M期阻滯。運用RT-PCR和WesternBlotting技術檢測G2/M期關鍵基因CyclinB1和CDK1的表達情況,其結果表明吉馬酮能夠顯著抑制CyclinB1和CDK1在轉錄和翻譯水平上的表達。隨著吉馬酮濃度的提高,CyclinB1和CDK1的表達量下降,而且細胞周期阻滯在G2期,說明吉馬酮通過調節(jié)CyclinB1和CDK1的表達來誘導細胞G2/M期阻滯從而抑制癌細胞增殖。
　　(3)通過WesternB

4、lotting檢測吉馬酮對抑癌基因P53表達情況,并檢測凋亡相關基因Bcl-2家族中的Bax、Bcl-2的影響,其結果顯示吉馬酮能夠增強抑癌基因P53的表達,并促進促凋亡因子Bax的表達量上升,抗凋亡因子Bcl-2的表達量隨藥物濃度增加而下降。
　　(4)通過Hoechst33258染色檢測吉馬酮對HepG2細胞發(fā)生凋亡的影響,結果表明著色細胞明顯增多,并且通過PI/AnnexinV雙染流式檢測吉馬酮對HepG2細胞發(fā)生凋亡的影響

5、,結果發(fā)現(xiàn)正常細胞比例明顯下降,早期凋亡和晚期凋亡細胞比例明顯上升,這些結果都說明吉馬酮能夠促進HepG2細胞發(fā)生凋亡。
　　(5)通過Western Blotting檢測JAKs/STATs信號通路中p-JAK2和p-STAT3的表達情況,結果表明p-JAK2和p-STAT3的表達量隨著藥物濃度的增加而下降,說明吉馬酮能夠能夠有效抑制JAK2/STAT3信號通路的異?；罨?從而達到抑制腫瘤發(fā)生的目的。
　　通過以上結果表明