肝衰竭患者血漿抑制HepG2細(xì)胞生長和增殖的研究.pdf

1、背景和目的：越來越多的研究表明肝再生障礙是肝衰竭患者死亡的一個(gè)主要原因，但目前國內(nèi)外對(duì)肝衰竭患者肝再生障礙的機(jī)制并不清楚。本研究通過體外實(shí)驗(yàn)，探討肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞生長及增殖的影響，并進(jìn)一步探討其對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞周期蛋白D1（CyclinD1）、細(xì)胞周期蛋白依賴激酶4（cyclin-dependentkinase4，CDK4）表達(dá)的影響，初步了解肝衰竭患者肝再生障礙的原因及機(jī)制。方法：（1）血漿置換時(shí)收集肝衰竭患者血漿

2、、肝素抗凝；（2）應(yīng)用MTT法檢測50％肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞生長和增殖作用，并與正常對(duì)照血漿及小牛血清做對(duì)照；（3）分別使用5ng/ml表皮生長因子（epidermalgrowthfactor，EGF），10ng/mlEGF，20ng/mlEGF刺激50％肝衰竭患者血漿培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞，并觀察細(xì)胞生長及增殖情況；（4）采用Hoechst染色法觀察肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)；（5）采用Western-blott

3、ing（WB）技術(shù)檢測肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)CyclinD1、CDK4蛋白表達(dá)的影響。結(jié)果：（1）MTT比色法結(jié)果表明，與正常對(duì)照血漿比較，肝衰竭患者血漿在體外對(duì)HepG2細(xì)胞生長及增殖有明顯的抑制作用，在作用12h后，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），且這種抑制作用呈現(xiàn)時(shí)間依賴性；（2）EGF對(duì)正常對(duì)照組HepG2細(xì)胞的生長及增殖有明顯促進(jìn)作用，但僅大劑量EGF對(duì)肝衰竭組HepG2細(xì)胞生長和增殖有一過性刺激作用。與EGF刺激正常

4、對(duì)照組比較，肝衰竭組各時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞生長與增殖仍受到明顯抑制。（3）形態(tài)學(xué)觀察：Hoechst凋亡染色結(jié)果表明，肝衰竭患者血漿作用于HepG2細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率無明顯增加（P>0.05）；（4）WB結(jié)果顯示，隨著作用時(shí)間的延長，肝衰竭患者血漿抑制HepG2細(xì)胞內(nèi)CyclinD1、CDK4的表達(dá)。結(jié)論：肝衰竭患者血漿對(duì)HepG2細(xì)胞生長及增殖具有較強(qiáng)的抑制作用，大劑量EGF對(duì)肝衰竭患者血漿培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞增殖雖有一過性刺激作用，但并不能逆