TLR7激活對HepG2細(xì)胞增殖和遷移的影響.pdf

1、目的：探討TLR7配體Gardiquimod對HepG2細(xì)胞增殖及遷移的影響及其可能信號機(jī)制。
　　方法：HepG2細(xì)胞經(jīng)不同時(shí)間和劑量的Gardiquimod處理后,MTT技術(shù)分析Gardiquimod對HepG2細(xì)胞增殖的影響;Gardiquimod(2μg/ml)體外刺激細(xì)胞1-5 d后流式細(xì)胞技術(shù)分析Gardiquimod對HepG2細(xì)胞增殖的影響;不同時(shí)間的Gardiquimod(2μg/ml)體外刺激HepG2細(xì)胞后,

2、提取細(xì)胞總RNA和總蛋白,RT-PCR分析VEGF和TIMP1轉(zhuǎn)錄水平的變化;Western blot分析檢測CyclinB1和CyclinE的表達(dá)量以及絲裂原蛋白激活激酶-胞外信號調(diào)節(jié)激酶(MAPKs-ERK1/2)信號通路,并通過MAPKs-ERK1/2特異性阻斷劑PD98059阻斷相應(yīng)的信號途徑,進(jìn)而分析兩者的相關(guān)性;細(xì)胞劃痕技術(shù)檢測Gardiquimod對HepG2遷移的影響。
　　結(jié)果：HepG2細(xì)胞中表達(dá)TLR7,但較

3、外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC)較少。MTT結(jié)果顯示,不同時(shí)間或者劑量的Gardiquimod刺激HepG2細(xì)胞后,細(xì)胞的增殖被抑制。流式細(xì)胞技術(shù)結(jié)果表明,Gardiquimod(2μg/ml)處理細(xì)胞1-5 d后,S期細(xì)胞的比例明顯降低;Gardiquimod刺激HepG210 min后下調(diào)細(xì)胞中VEGF mRNA的表達(dá),而刺激細(xì)胞30 min后TIMP1 mRNA的表達(dá)

4、有明顯的上調(diào);Western blot結(jié)果顯示,不同時(shí)間的Gardiquimod(2μg/ml)能夠抑制細(xì)胞中CyclinB1和CyclinE的表達(dá);并且細(xì)胞中的ERK1/2的磷酸化水平明顯降低;抑制劑結(jié)果顯示PD98059能有效抑制HepG2細(xì)胞中ERK1/2磷酸化作用,并且上述VEGF的降低與其相關(guān);細(xì)胞劃痕結(jié)果表明,Gardiquimod(2μg/ml)刺激細(xì)胞不同時(shí)間后,細(xì)胞的遷移速度和程度都明顯受到了抑制。
　　結(jié)論：L