沉默UBC9對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖與凋亡的影響.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩45頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  檢測(cè)泛素結(jié)合酶9(ubiquitin conjugating enzymes9,UBC9)在肝癌細(xì)胞中的表達(dá),并采用shRNA方法研究下調(diào)UBC9后的肝癌細(xì)胞增殖、凋亡的改變及其可能的機(jī)制。
  方法:
  1、采用蛋白印跡(Western Blot)技術(shù)檢測(cè)人肝癌細(xì)胞株HepG2、LM3、MHCC97h、Huh7、SMMC-7721中UBC9的表達(dá)。
  2、設(shè)計(jì)并合成針對(duì)UBC9的短發(fā)夾RNA(s

2、hort hairpin RNA,shRNA)質(zhì)粒,采用陽(yáng)離子脂質(zhì)體技術(shù)進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。實(shí)驗(yàn)設(shè)置正常肝癌細(xì)胞組、脂質(zhì)體組、空載質(zhì)粒( NC-shRNA)組以及目的質(zhì)粒(UBC9-shRNA)組。
  3、采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative Real Time-PCR,qRT-PCR)和蛋白印跡(Western Blot)技術(shù)分別檢測(cè)各組細(xì)胞UBC9在轉(zhuǎn)染前后mRNA及蛋白水平的表達(dá)。
  4、采用CCK8法

3、檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后肝癌細(xì)胞增殖能力的變化,通過Annexin V-FITC/PI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后肝癌細(xì)胞凋亡的變化。
  5、采用蛋白印跡(Western Blot)技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞中Bcl-2以及NF-κB p65蛋白表達(dá)水平的改變。
  結(jié)果:
  1、在HepG2、LM3、MHCC97h、Huh7、SMMC-7721這5種肝癌細(xì)胞株中UBC9蛋白表達(dá)均呈陽(yáng)性高表達(dá),UBC9表達(dá)量最高的是MHCC97h、最低的

4、是LM3,HepG2、SMMC-7721、Huh7這3中細(xì)胞中UBC9表達(dá)量沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
  2、目的質(zhì)粒UBC9-shRNA轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞24h及48h后,UBC9在mRNA水平(24h)以及蛋白水平(48h)相比較正常肝癌細(xì)胞組、脂質(zhì)體組及空載質(zhì)粒組均下降。
  3、CCK8法顯示UBC9-shRNA組肝癌細(xì)胞的增殖能力明顯下降,流式細(xì)胞儀顯示UBC9-shRNA組肝癌細(xì)胞的凋亡水平最高。
  4、Western

5、 Blot技術(shù)顯示,相比較正常肝癌細(xì)胞組、脂質(zhì)體組及NC-shRNA組,UBC9-shRNA組中Bcl-2蛋白水平明顯下降,NF-κB p65蛋白水平下降。
  結(jié)論:
  1、在肝癌細(xì)胞中UBC9為陽(yáng)性高表達(dá),本實(shí)驗(yàn)旨在研究肝癌細(xì)胞增殖與凋亡的變化,故選取HepG2肝癌細(xì)胞做后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
  2、目的質(zhì)粒 UBC9-shRNA能夠下調(diào)肝癌細(xì)胞中UBC9的表達(dá),下調(diào)UBC9后的肝癌細(xì)胞增殖能力下降,細(xì)胞的凋亡增加。

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論