siRNA沉默TGFBR2基因?qū)epG2細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：通過siRNA干擾技術(shù)研究TGFBR2基因沉默對肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞增殖的影響，初步探討TGFBR2對肝癌細(xì)胞的增殖和侵襲的作用，為肝癌的基因靶向治療提供初步的理論依據(jù)。
　　方法：設(shè)計3種針對TGFBR2基因的siRNA片段，以脂質(zhì)體lipo2000為媒介將其轉(zhuǎn)染進(jìn)HepG2細(xì)胞中；通過real-time PCR檢測手段篩選出沉默效率最高的siRNA片段，并將對應(yīng)的DNA序列插入到pEGFP-N3質(zhì)粒中，再將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到

2、JM109菌體內(nèi)進(jìn)行克??；提取重組質(zhì)粒并將其轉(zhuǎn)染到HepG2細(xì)胞中，通過Western blot檢測TGFBR2蛋白表達(dá)水平。先用不同濃度的TGF-β1細(xì)胞因子刺激正常HepG2細(xì)胞，觀察細(xì)胞增殖情況并篩選最佳TGF-β1濃度。再用TGF-β1刺激siRNA重組質(zhì)粒干擾后的HepG2細(xì)胞，對比干擾前后細(xì)胞增殖的變化。
　　結(jié)果：在3種siRNA片段中，以siRNA-1對TGFBR2基因的沉默效率最高。與空白對照組比較，5ng/mL

3、的TGF-β1即可顯著抑制HepG2細(xì)胞的增殖(P<0.05)，并且與高濃度的10ng/mL TGF-β1組無差異(P>0.05)。用5ng/mL的TGF-β1刺激HepG2細(xì)胞，與blank組和siRNA-NC組比較，siRNA-1組細(xì)胞增殖加快(P<0.05)，但仍低于未加TGF-β1細(xì)胞因子的正常HepG2細(xì)胞(P<0.05)。
　　結(jié)論：通過siRNA干擾技術(shù)沉默TGFBR2基因后，可減弱TGF-β1信號傳導(dǎo)通路對HepG