刺參酸性粘多糖對肝腫瘤HepG2細(xì)胞增殖及相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究刺參酸性粘多糖（SJAMP）對人肝腫瘤HepG2細(xì)胞增殖的抑制作用，探討其對HepG2細(xì)胞增殖有關(guān)的基因和蛋白表達(dá)的影響，為揭示刺參酸性粘多糖抗肝腫瘤作用提供依據(jù)。
　　 方法:人肝腫瘤HepG2細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基，人正常肝細(xì)胞張氏細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)于含10％胎牛血清的PRMI-1640培養(yǎng)基，兩種細(xì)胞置于37℃、含0.05％（體積分?jǐn)?shù)）CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。取對數(shù)生長期的細(xì)胞，培養(yǎng)基中加入刺

2、參酸性粘多糖進(jìn)行干預(yù)，濃度依次為0、0.5、2.0、8.0μg/ml。干預(yù)一定時間后，透射電鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化，MTT實(shí)驗(yàn)觀察刺參酸性粘多糖對細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、P21、P53、MDM2、pRb、E2F-1、cyclinD1、CDK4蛋白的表達(dá)，實(shí)時熒光定量PCR(Real-timePCR, RT-PCR)檢測P53、MDM2、、pRb、E2F-1、cyclinD1、C

3、DK4 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，SJAMP干預(yù)后的HepG2細(xì)胞內(nèi)部形態(tài)發(fā)生改變并見細(xì)胞脫落狀凋亡;MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明SJAMP能夠抑制HepG2細(xì)胞增殖，且隨著干預(yù)劑量（0、0.5、2.0、8μg/ml）增加和干預(yù)時間(12h、24h、48h)延長抑制作用增強(qiáng)(P＜0.05)，SJAMP對張氏細(xì)胞增殖沒有顯著的抑制作用(P＞0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期結(jié)果顯示，SJAMP使HepG2細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)

4、生G1期停滯，且隨著SJAMP干預(yù)劑量的增加，HepG2細(xì)胞停留在G1期的細(xì)胞增加，G2期和S期的細(xì)胞相應(yīng)減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），SJAMP干預(yù)后張氏細(xì)胞細(xì)胞周期未發(fā)生顯著改變（P＞0.05）。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果表明，隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細(xì)胞PCNA的表達(dá)降低，P21蛋白表達(dá)升高，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），張氏細(xì)胞PCNA和P21蛋白表達(dá)隨著SJAMP干預(yù)劑量的變化未發(fā)生顯著改變(P＞0

5、.05)。RT-PCR檢測結(jié)果顯示，隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細(xì)胞P53、MDM2、E2F-1、cyclinD1以及CDK4 mRNA的表達(dá)均降低，pRb mRNA的表達(dá)增加，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，各組張氏細(xì)胞上述指標(biāo)mRNA的表達(dá)未發(fā)生顯著改變(P＞0.05)。免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果顯示，SJAMP干預(yù)后，HepG2細(xì)胞P53、MDM2、E2F-1、cyclinD1以及CDK4蛋白的表達(dá)降低，pRb蛋白的表達(dá)升

6、高，且隨著SJAMP干預(yù)劑量的增加而變化，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，各組張氏細(xì)胞各蛋白表達(dá)未發(fā)生顯著變化(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:刺參酸性粘多糖能夠抑制人肝腫瘤HepG2細(xì)胞的增殖，其機(jī)制可能為SJAMP通過抑制PCNA、抑癌基因P53及其蛋白、癌基因MDM2及其蛋白的表達(dá)以及作用于細(xì)胞周期G1期的Rb-E2F通路，抑制其E2F-1、cyclinD1、CDK4基因及蛋白的表達(dá)，促進(jìn)pRb和P21基因及蛋白的表達(dá)，使