刺參酸性粘多糖通過線粒體介導(dǎo)的肝腫瘤細(xì)胞凋亡作用研究.pdf

1、目的:研究刺參酸性粘多糖（SJAMP）對人肝癌HepG2細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用，觀察SJAMP對于肝癌細(xì)胞線粒體凋亡通路的影響并探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法:體外培養(yǎng)HepG2細(xì)胞及張氏肝細(xì)胞，以張氏肝細(xì)胞作為正常細(xì)胞參照組，將0.25μg/mL、1.0μg/mL、4.0μg/mL的SJAMP分別作用于HepG2細(xì)胞及張氏細(xì)胞一段時間后，透射電鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)的變化，熒光顯微鏡觀察刺參酸性粘多糖對細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的變化，流式細(xì)胞

2、術(shù)檢測線粒體膜電位，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測Bcl-2家族中Bax及Bcl-2蛋白、抗凋亡蛋白生物素Survivin、第二線粒體Caspse家族激活蛋白Smac、細(xì)胞色素C(Cytc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表達(dá)，熒光定量PCR(Real-time PCR, RT-PCR)檢測Bax、Bcl-2、Cytc以及Caspase-3mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、透射電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，SJAMP作用后

3、的HepG2細(xì)胞出現(xiàn)凋亡現(xiàn)象、染色體發(fā)生固縮、核膜消失等形態(tài)學(xué)改變;而張氏細(xì)胞與HepG2空白對照組并不表現(xiàn)出凋亡等相關(guān)形態(tài)學(xué)改變。
　　 2、熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子結(jié)果顯示:與空白對照組相比，隨著SAJMP作用劑量的增加，HepG2細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光IOD值逐漸降低，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細(xì)胞內(nèi)鈣離子熒光IOD值并沒有隨著SJAMP劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

4、>　　 3、流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示:與空白對照組相比:隨著SJAMP作用劑量的增加，各HepG2細(xì)胞組內(nèi)的線粒體膜電位逐漸下降，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細(xì)胞線粒體膜電位并沒有隨著SJAMP劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 4、免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果表明:與空白對照組相比:隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細(xì)胞內(nèi)Bax、Cytc、Smac以及Caspase-3蛋白的表達(dá)逐

5、漸增強(qiáng)，且Bcl-2和Survivin蛋白的表達(dá)被抑制，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細(xì)胞Bax、Bcl-2、Cytc、Smac、Survivin以及Caspase-3蛋白的表達(dá)并沒有隨著SJAMP作用劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 5、實時定量RT-PCR結(jié)果顯示:與空白對照組相比，隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細(xì)胞內(nèi)Bax、Cytc和Caspase-3 mRNA

6、的表達(dá)量逐漸升高，而Bcl-2基因mRNA表達(dá)的量逐漸降低，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細(xì)胞線Bax、Bel-2、Cytc和Caspase-3 mRNA的表達(dá)量并沒有隨著SJAMP劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 結(jié)論:
　　 1、SJAMP可誘導(dǎo)人肝腫瘤HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡。
　　 2、SJAMP可通過抑制Bcl-2及Surviving和促進(jìn)Bax、Cyt