刺參酸性粘多糖通過線粒體介導的肝腫瘤細胞凋亡作用研究.pdf

1、目的:研究刺參酸性粘多糖（SJAMP）對人肝癌HepG2細胞的凋亡誘導作用，觀察SJAMP對于肝癌細胞線粒體凋亡通路的影響并探討其可能的作用機制。
　　 方法:體外培養(yǎng)HepG2細胞及張氏肝細胞，以張氏肝細胞作為正常細胞參照組，將0.25μg/mL、1.0μg/mL、4.0μg/mL的SJAMP分別作用于HepG2細胞及張氏細胞一段時間后，透射電鏡觀察細胞結構的變化，熒光顯微鏡觀察刺參酸性粘多糖對細胞內鈣離子濃度的變化，流式細胞

2、術檢測線粒體膜電位，免疫細胞化學法檢測Bcl-2家族中Bax及Bcl-2蛋白、抗凋亡蛋白生物素Survivin、第二線粒體Caspse家族激活蛋白Smac、細胞色素C(Cytc)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表達，熒光定量PCR(Real-time PCR, RT-PCR)檢測Bax、Bcl-2、Cytc以及Caspase-3mRNA表達。
　　 結果:
　　 1、透射電鏡下觀察發(fā)現，SJAMP作用后

3、的HepG2細胞出現凋亡現象、染色體發(fā)生固縮、核膜消失等形態(tài)學改變;而張氏細胞與HepG2空白對照組并不表現出凋亡等相關形態(tài)學改變。
　　 2、熒光顯微鏡下觀察細胞內鈣離子結果顯示:與空白對照組相比，隨著SAJMP作用劑量的增加，HepG2細胞內鈣離子熒光IOD值逐漸降低，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細胞內鈣離子熒光IOD值并沒有隨著SJAMP劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。

4、>　　 3、流式細胞儀檢測結果顯示:與空白對照組相比:隨著SJAMP作用劑量的增加，各HepG2細胞組內的線粒體膜電位逐漸下降，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細胞線粒體膜電位并沒有隨著SJAMP劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 4、免疫細胞化學結果表明:與空白對照組相比:隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細胞內Bax、Cytc、Smac以及Caspase-3蛋白的表達逐

5、漸增強，且Bcl-2和Survivin蛋白的表達被抑制，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細胞Bax、Bcl-2、Cytc、Smac、Survivin以及Caspase-3蛋白的表達并沒有隨著SJAMP作用劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 5、實時定量RT-PCR結果顯示:與空白對照組相比，隨著SJAMP作用劑量的增加，HepG2細胞內Bax、Cytc和Caspase-3 mRNA

6、的表達量逐漸升高，而Bcl-2基因mRNA表達的量逐漸降低，各組間的差異具有顯著性(P＜0.05);而張氏細胞線Bax、Bel-2、Cytc和Caspase-3 mRNA的表達量并沒有隨著SJAMP劑量的增加而改變，各組間的差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　 結論:
　　 1、SJAMP可誘導人肝腫瘤HepG2細胞發(fā)生凋亡。
　　 2、SJAMP可通過抑制Bcl-2及Surviving和促進Bax、Cyt