不同齒科合金通過線粒體途徑誘導(dǎo)L929細胞凋亡的觀察.pdf

1、目的：齒科合金已經(jīng)廣泛應(yīng)用于口腔修復(fù)領(lǐng)域中，在口腔內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境中，由于合金材料所析出的金屬離子會對口腔細胞和組織形成不良刺激，所以對齒科合金生物相容性的研究一直是國內(nèi)外學(xué)者的關(guān)注熱點之一。本研究應(yīng)用免疫熒光和蛋白印記的方法檢測了5種齒科合金及新研制的3種合金浸提液引起小鼠L929細胞發(fā)生凋亡時，線粒體內(nèi)促凋亡蛋白的表達情況，探討了金屬材料誘導(dǎo)細胞凋亡的可能信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，為進一步揭示細胞凋亡的分子機制及從分子水平上評價材料的生物相容性提供

2、實驗依據(jù)。 方法：①L929細胞用含10％胎牛血清的RPMI1640細胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO2.的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。②收集陰性對照組和實驗組的L929細胞(3×106個)于Ep管中，PBS清洗3遍，加入羅丹明123染液40ug/ml，37℃避光孵育60min，流式細胞儀檢測羅丹明123的熒光強度。③用熒光檢測試劑盒檢測細胞色素C在細胞內(nèi)分布變化。④Western Blotting檢測陰性對照組和實驗組的L929細胞的細胞色

3、素C在線粒體和胞漿中的表達。 結(jié)果：⑴各組細胞隨處理時間的延長，其羅丹明123熒光強度逐漸減弱，表明了線粒體膜電位發(fā)生了去極化。48小時的結(jié)果為：陰性對照組>金合金組>銀鈀合金組>鈷鉻合金組>鎳鉻合金組>1號合金組>2號合金組>3號合金組。72小時的結(jié)果為：陰性對照組>金合金組>銀鈀合金組>鈷鉻合金組>1號合金組>鎳鉻合金組>3號合金>2號合金組。⑵48小時處理組，除鈷鉻合金組，2號合金組，3號合金組外，細胞中細胞色素C蛋白的熒

4、光分布為一些粗點或細塊狀。72小時處理組，細胞色素C蛋白的熒光在胞漿中分布較為明顯，為彌散的細點狀。⑶在細胞線粒體和胞漿中均有細胞色素C的表達，并且隨時間的延長，線粒體中的細胞色素C表達量逐漸減少，胞漿中的表達量逐漸增多。 結(jié)論：①7種齒科合金中的金屬離子都會不同程度地誘導(dǎo)細胞凋亡，且其凋亡途徑為線粒體途徑。②在凋亡的過程中，伴有促凋亡蛋白細胞色素C由線粒體到胞漿的釋放過程及線粒體跨膜電位的下降。③金屬合金可能引起細胞色素C表達