流式細(xì)胞術(shù)檢測無鎳奧氏體不銹鋼對L929細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：
　　 金屬合金作為口腔修復(fù)材料應(yīng)用于人體內(nèi)，在人體生理環(huán)境中使用，對生命有機(jī)體會產(chǎn)生一定的作用和影響。生物相容性評價是研究醫(yī)用金屬材料生物性能的重要內(nèi)容之一，目前新材料在用于人體之前都要求必須經(jīng)過全面的生物相容性檢測。無鎳奧氏體不銹鋼（BIOSSN4）是中科院金屬研究所研制的一種新型的醫(yī)用金屬材料，這種材料優(yōu)良的機(jī)械性能已經(jīng)通過實驗得到驗證，但其生物相容性還需要進(jìn)一步的研究。本實驗就是從生物學(xué)角度，通過細(xì)胞培養(yǎng)及流式細(xì)胞

2、儀檢測，來了解無鎳奧氏體不銹鋼和其他4種醫(yī)學(xué)常用的金屬合金對L929細(xì)胞凋亡的影響，通過比較，進(jìn)而評價一下無鎳奧氏體不銹鋼的生物相容性。
　　 材料與方法：
　　 1、細(xì)胞培養(yǎng)
　　 小鼠成纖維細(xì)胞L929用含10％胎牛血清的RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。
　　 2、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞在凋亡不同階段的凋亡數(shù)量
　　 將5種金屬合金（無鎳奧氏體不銹剛、317L奧

3、氏體不銹鋼金合金、鈷鉻合金、鎳鉻合金、金合金）及陰性對照組的浸提液與L929細(xì)胞聯(lián)合培養(yǎng)24、48小時后分別進(jìn)行EGFP，PI雙染色，然后通過流式細(xì)胞儀檢測不同實驗組細(xì)胞在凋亡不同時期的凋亡率。
　　 3、熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞
　　 滴一滴上述各組染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞，分別于熒光顯微鏡下觀察Annexin V-EGFP熒光信號呈綠色，PI熒光信號呈紅色。
　　 結(jié)果：
　　

4、實驗組細(xì)胞經(jīng)AnnexinV-EGFP和PI雙染色后，熒光顯微鏡觀察可見細(xì)胞在凋亡不同時期的形態(tài)變化。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果表明各實驗組引起的細(xì)胞凋亡率是不同的。其中金合金組細(xì)胞凋亡率最低并且接近陰性對照組，無鎳奧氏體不銹鋼組引起的細(xì)胞凋亡率與金合金組較接近，其它金屬合金凋亡率均高于金合金組，其中鎳鉻合金引起的凋亡率最高且遠(yuǎn)高于金合金組，其凋亡率由低到高的順序為：金合金<無鎳奧氏體不銹鋼<鈷鉻合金<317L奧氏體不銹鋼<鎳鉻合金。