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文檔簡介
1、流式細(xì)胞術(shù)是20世紀(jì)中期迅速發(fā)展起來的一項(xiàng)快速分析和分選的技術(shù)。它將液流技術(shù)、光學(xué)技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)以及電子技術(shù)集于一體,完成對懸浮粒子的準(zhǔn)確分析和分選。20世紀(jì)80年代這項(xiàng)技術(shù)開始在植物DNA含量、細(xì)胞周期、轉(zhuǎn)基因以及次級代謝產(chǎn)物累積檢測等方面得到廣泛應(yīng)用。本文以不同細(xì)胞基因表達(dá)的差異化研究為出發(fā)點(diǎn),通過調(diào)整消化酶組份、消化時(shí)間、固定液的選取、懸浮液的制備、染料的選擇等,探索并初步建立了玉米根尖原生質(zhì)體的分離、流式分析、分選及核酸提取技
2、術(shù)體系;同時(shí),還以五種不同類型的玉米淀粉為材料,成功進(jìn)行了不同來源淀粉的分析和分選,首次建立了淀粉的流式分選技術(shù)體系。取得的主要研究成果有:
1.玉米根尖組織原生質(zhì)體的分離和流式分析
首先運(yùn)用酶解法分離根尖組織原生質(zhì)體,然后再利用流式細(xì)胞儀對原生質(zhì)體進(jìn)行分析和分選,可得出以下結(jié)論:(1)玉米根尖組織在酶解液(含1.00%的纖維素酶及0.30%的離析酶,甘露醇濃度為13%,pH為5.8的CPW溶液)中酶解6h可以得到大
3、量有活性的原生質(zhì)體。(2)利用25%的蔗糖溶液可實(shí)現(xiàn)對粗制原生質(zhì)體的純化。(3)根尖組織原生質(zhì)體需要Hoechst33342在溫度為38℃,pH為11.59的條件下才能達(dá)到最佳的染色效果。(4)根尖原生質(zhì)體能夠分成兩個(gè)明顯的細(xì)胞亞群。
2.玉米根尖固定及其核酸提取
通過對固定過的玉米根尖組織原生質(zhì)體核酸的提取實(shí)驗(yàn),得出以下結(jié)論:(1)經(jīng)過固定的組織在酶解液(含2.80%的纖維素酶及0.60%的離析酶,pH為5.8的C
4、PW溶液)中,35℃處理4-5小時(shí),可得到大量原生質(zhì)體。(2)利用80%高濃度蔗糖可純化酶解后原生質(zhì)體。(3)以Carnoy2、Methacarn溶液固定的玉米根尖原生質(zhì)體進(jìn)行核酸提取,對提取核酸的濃度和質(zhì)量影響較小,是適合以核酸提取為目的的材料固定方法。
3.不同類型玉米淀粉的流式分析和分選
通過對不同類型玉米淀粉的流式分析,得出以下結(jié)論:(1)不同類型的玉米淀粉均可被熒光染料APTS染色,0.25%的gelzan
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