流式細(xì)胞術(shù)在臨床中的應(yīng)用描述

1、流式細(xì)胞術(shù)在臨床中的應(yīng)用,馬雷,流式細(xì)胞術(shù),20世紀(jì)60年代末發(fā)展起來的細(xì)胞定性和定量的技術(shù)。通過收集激光照射到細(xì)胞后的散射光信號(hào)和熒光信號(hào)反映細(xì)胞的物理化學(xué)特征，并且根據(jù)細(xì)胞的物理化學(xué)特征分選得到感興趣的細(xì)胞。,流式細(xì)胞儀構(gòu)造模式圖,液流系統(tǒng)光學(xué)系統(tǒng)電子系統(tǒng)分選系統(tǒng),細(xì)胞與分子生物學(xué)、流體力學(xué)、電磁理論和生物技術(shù)、激光技術(shù)、熒光技術(shù)、光電子技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)、納米技術(shù)等。流式細(xì)胞術(shù)是現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)發(fā)展的綜合交叉的

2、產(chǎn)物，是集多種技術(shù)發(fā)展于一體的“大成者”。,涉及多種學(xué)科及技術(shù),,,,,,流式在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用,1、JY細(xì)胞周期與DNA倍體分析,標(biāo)本類型： 胸水和腹水 血液標(biāo)本 組織塊標(biāo)本,原理,臨床意義：腫瘤的早期診斷與鑒別良惡性胸腔積液和腹水的鑒別診斷用于臨床腫瘤治療效果監(jiān)測(cè)用于臨床抗腫瘤治療時(shí)藥物的選擇用于早期淋巴瘤的診斷用于良性腫瘤與中

3、低度惡性腫瘤的鑒別用于腫瘤患者的預(yù)后判斷,流式在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用,2、JY細(xì)胞凋亡分析標(biāo)本類型： 胸水和腹水 血液標(biāo)本 組織塊標(biāo)本,原理,,,,臨床意義： 用于臨床抗腫瘤療效監(jiān)測(cè) 早期凋亡細(xì)胞百分?jǐn)?shù)是臨床抗腫瘤治療有效的較早期評(píng)價(jià)指標(biāo),流式在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用,3、JY腫瘤多藥耐藥基因CD243檢測(cè)標(biāo)本類型：胸腔積液腹水組

4、織標(biāo)本貼壁培養(yǎng)細(xì)胞,,原理： 化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，依賴于進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的藥物濃度的高低。多藥耐藥基因-1是一種糖蛋白，編號(hào)為CD243。這種糖蛋白可以大量捕獲進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的化療藥物，并將其“搬出”細(xì)胞。使細(xì)胞內(nèi)部化療藥物濃度降低，造成藥物對(duì)瘤細(xì)胞的殺傷作用降低或消失，最終出現(xiàn)耐藥性現(xiàn)象。,,臨床意義：了解瘤細(xì)胞CD243表達(dá)水平，如果是高表達(dá)，提示化療療效可能很差，宜采取放療。如果瘤細(xì)胞CD243表達(dá)水平很低或不能檢

5、出，化療過程中建議定期監(jiān)測(cè)瘤細(xì)胞CD243水平。輔助判斷預(yù)后。,流式在免疫學(xué)中的應(yīng)用,4、JY淋巴細(xì)胞亞群標(biāo)本類型： 靜脈血臨床意義可將淋巴細(xì)胞分類為,,臨床意義B細(xì)胞減少見于原發(fā)及繼發(fā)性免疫功能低下、嚴(yán)重的病毒感染等情況。 B細(xì)胞增高，提示機(jī)體體液免疫功能被增強(qiáng)，見于臨床各種細(xì)菌性感染。及B細(xì)胞白血病。NK細(xì)胞數(shù)量是腫瘤臨床病情判斷、療效監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。NK細(xì)胞減少見于腦心肌炎病毒、流感病毒、EB病毒、柯薩奇病

6、毒等。,流式在免疫學(xué)中的應(yīng)用,5、JY總T、T4、T8淋巴細(xì)胞標(biāo)本類型： 靜脈血,臨床意義T4增高，主要見于臨床各種細(xì)菌性感染性疾病。T4降低，主要見于臨床各種病毒感染性疾病。有助于艾滋病的診斷、疾病分期判斷和療效監(jiān)測(cè)。,正常人,HIV感染者,AIDS病人,T8增高，多見于HBV、巨細(xì)胞病毒（CMV）、人類皰疹病毒 （EB）及結(jié)核桿菌感染。CD8+CD38+ 亞群是疾病進(jìn)展和病毒復(fù)制的預(yù)測(cè)指標(biāo)。T8減低，多見于r免疫球

7、蛋白缺乏癥、胸腺發(fā)育不良和糖尿病等。,AIDS病人,HIV感染者,正常人,流式在免疫學(xué)中的應(yīng)用,6、JY輔助性T細(xì)胞 （ Th ）和誘導(dǎo)性T細(xì)胞（Ti）檢測(cè)臨床意義：Th細(xì)胞（CD4+CD29+）減少見于免疫缺陷、嚴(yán)重感染、腫瘤患者，可作為腫瘤診斷及療效監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。增多見于各種感染。Ti細(xì)胞（CD4+CD29-）具有誘發(fā)免疫應(yīng)答的功能。,流式在免疫學(xué)中的應(yīng)用,7、JY效應(yīng)T細(xì)胞（Th1、Th2）檢測(cè)8、JY調(diào)節(jié)性T細(xì)胞檢測(cè)9、

8、JY輔助性T 細(xì)胞17(Th17)檢測(cè),CD4+T細(xì)胞亞群的分化與細(xì)胞因子的關(guān)系,TH1/TH2,自身免疫病,,,參與,拮抗,天然TREG細(xì)胞在免疫系統(tǒng)中的作用,平衡狀態(tài)：既可有效清除外來病原體，又可避免過度的炎癥反應(yīng)。,,缺乏調(diào)節(jié)性T細(xì)胞：免疫反應(yīng)過度，造成自身免疫病、哮喘、過敏反應(yīng)、移植排斥、流產(chǎn)等。,過多的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞：免疫反應(yīng)低下，無法有效清除病原體及腫瘤，造成感染及癌癥。,,,,,,Th17 細(xì)胞參與炎性反應(yīng)和宿主

9、抗胞外病原體反應(yīng)。作為可分泌IL-17A的Th的一個(gè)亞群，Th17 在自身免疫病發(fā)生過程中發(fā)揮重要作用。臨床意義Th17細(xì)胞釋放的I L - 1 7 可引發(fā)自身免疫性腦炎(EAE)、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等自身免疫性疾病。,流式在細(xì)菌感染疾病中的應(yīng)用,10、JY中性粒細(xì)胞膜表面CD64檢測(cè)標(biāo)本類型： 靜脈血原理： 無論胞內(nèi)或胞外細(xì)菌感染，都會(huì)引起CD64特異性增高。臨床意義： 查閱中、外文

10、獻(xiàn)，發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞膜表面CD64檢測(cè)與CRP、PCT、中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)相比，可以提高對(duì)感染和膿毒血癥的檢出率，且具有早期診斷價(jià)值，靈敏度和特異性均較高。,,CD64分析可以更好區(qū)分感染性與非感染性炎癥反應(yīng)，診斷急性感染和全身感染的靈敏度和特異性較高門、急診患者細(xì)菌感染的篩查和預(yù)后判斷細(xì)菌性感染與非細(xì)菌性感染的鑒別診斷術(shù)后感染與應(yīng)激反應(yīng)的鑒別診斷感染患者的抗生素治療監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)抗生素用藥,流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷,11、JY紅細(xì)

11、胞表面相關(guān)免疫球蛋白（EAIg）檢測(cè)臨床意義：陽(yáng)性見于臨床免疫性溶血性貧血（IHA）、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病。用于IHA的鑒別診斷與亞型分類用于新生兒溶血性疾病的監(jiān)測(cè),流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷,12、JY粒細(xì)胞表面相關(guān)免疫球蛋白（GAIg）檢測(cè)臨床意義：用于自身免疫性白細(xì)胞減少癥的鑒別診斷與亞型分類,流式在自身免疫性疾病的鑒別診斷,13、JY血小板表面相關(guān)免疫球蛋白（PAIg）檢測(cè)臨床意義：用于臨床特發(fā)性血小板減少性

12、紫癜（ITP）的篩查與診斷,流式在強(qiáng)直性脊柱炎鑒別診斷中的應(yīng)用,14、JY強(qiáng)直性脊柱炎相關(guān)抗原HLA-B27檢測(cè)標(biāo)本類型：靜脈血（2~3ml）原理：HLA-B27是脊柱關(guān)節(jié)病病因及發(fā)病機(jī)制的關(guān)鍵已經(jīng)被廣泛認(rèn)同，各種假說均支持患者由于存在HLA-B27的高表達(dá)引起了體內(nèi)異常的免疫應(yīng)答，從而導(dǎo)致了脊柱關(guān)節(jié)病的發(fā)生。臨床意義：用于強(qiáng)直性脊柱炎的輔助診斷與鑒別診斷用于臨床強(qiáng)制性脊柱炎高危人群的篩查,流式在造血干細(xì)胞移植中的應(yīng)用,15、

13、JY靜脈血造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)標(biāo)本類型：靜脈血2ml原理：造血干細(xì)胞表達(dá)CD34而不表達(dá)CD38，造血祖細(xì)胞既表達(dá)CD34也表達(dá)CD38。利用單克隆抗體，臨床流式技術(shù)可以很輕松對(duì)造血干細(xì)胞計(jì)數(shù)。臨床意義：用于臨床進(jìn)行干細(xì)胞采集前，對(duì)捐獻(xiàn)者動(dòng)員后外周血干細(xì)胞的動(dòng)員效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)和是否實(shí)施單采的時(shí)機(jī)判斷。用于貧血的鑒別。再障屬于干細(xì)胞受累，其靜脈血中的干細(xì)胞數(shù)量明顯減少。而缺鐵性等貧血干細(xì)胞數(shù)量正常。,流式在陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥中的應(yīng)

14、用,16、JY陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥單克隆檢測(cè)標(biāo)本類型：靜脈血（2~3ml）原理：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿（PNH）是一種補(bǔ)體介導(dǎo)的以血管內(nèi)溶血為主要特征的獲得性造血干細(xì)胞克隆性疾病。主要特征是血細(xì)胞膜上的錨蛋白減少甚至消失。通過測(cè)定紅細(xì)胞表面標(biāo)志物CD235a、錨蛋白CD59和能與中性粒細(xì)胞膜表面錨蛋白結(jié)合的FLAER，發(fā)現(xiàn)百分之一的PNH細(xì)胞克隆，是一種非常靈敏、特異的方法。臨床意義：用于PNH的診斷與鑒別診斷用于貧血的鑒