6種金屬合金對于L929細胞細胞周期、細胞凋亡及Bcl-2和Bax mRNA表達的影響.pdf

1、目的：金屬合金作為口腔修復材料應用于人體內在人體生理環(huán)境中使用對生命有機體會產生一定的作用和影響。生物相容性評價是研究醫(yī)用金屬材料的重要內容之一。本研究從細胞生物學及分子生物學角度對6種金屬合金的生物相容性進行評價：1．本研究主要通過細胞培養(yǎng)及流式細胞術檢測來了解金屬合金對于L929細胞的細胞周期及凋亡方面的影響進而評價其生物相容性。2．通過RT-PCR檢測Bcl-2和Bax mRNA表達探討金屬合金引起細胞凋亡的機制，同時為提出生物相

2、容性評價的新指標提供理論依據。 材料與方法: 1、細胞培養(yǎng) L929細胞用含10％胎牛血清的RPMI 1640細胞培養(yǎng)基在37℃、5％CO<,2>的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)并傳代。 2、流式細胞儀測細胞周期 將6種金屬合金浸提液及陰性對照與L929細胞培養(yǎng)24、48小時后進行PI染色，并通過流式細胞儀檢測不同實驗組細胞周期的改變。 3、凋亡細胞熒光檢測 將L929細胞接種于6孔培養(yǎng)板中并用金屬

3、合金浸提液培養(yǎng)48小時，經Annexin V-EGFP及PI染色進行雙染后于熒光顯微鏡下觀察凋亡細胞。 4、流式細胞儀測細胞凋亡 將6種金屬合金浸提液及陰性對照與L929細胞培養(yǎng)24、48小時后進行Annexin V-EGFP及PI染色，并通過流式細胞儀檢測細胞凋亡。 5、RT-PCR 將6種金屬合金浸提液及陰性對照與L929細胞培養(yǎng)48小時，用RT-PCR檢測細胞Bcl-2和Bax的mRNA表達。

4、 結果： 1、金屬合金對于L929細胞細胞周期的影響培養(yǎng)48小時后各組細胞表現(xiàn)出不同的增殖趨勢，其中金合金組和陰性對照組G2期比例最高，其它各組依次為鈷鉻合金組>2號鋼組>銀鈀合金組>鎳鉻合金組>3號鋼組。 2、金屬合金對于L929細胞凋亡的影響實驗組細胞經Annexin V-EGFP和PI染色，經熒光顯微鏡觀察可見凋亡細胞。流式細胞儀檢測結果表明各組間細胞凋亡率不同。其中金合金組細胞凋亡率最低并且接近與陰性對照組，其

5、它金屬合金凋亡率遠高于金合金其中鎳鉻合金引起的凋亡率最高且遠高于陰性對照組，其順序為金合金<鈷鉻合金<2號鋼<3號鋼<銀鈀合金<鎳鉻合金。 3、金屬合金對L929細胞Bcl-2和Bax mRNA的表達的影響各實驗組細胞Bcl-2和Bax mRNA的表達不同。Bcl-2/Bax的比值由高到低依次為：陰性對照組>金合金組>鈷鉻合金組>2號鋼組>鎳鉻合金組>銀鈀合金組>3號鋼組。 結論: 1、金屬合金可能引起L929細