DDFA對重癥胰腺炎大鼠心臟細胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達的影響.pdf

1、背景 重癥急性胰腺炎(SAP)常并發(fā)多器官功能障礙(MODS)，其胰外器官損傷中，心功能障礙(胰心綜合征)較為常見，急性胰腺炎之心臟血管反應與損害包括心功能改變、心律失常、休克、中毒性心肌炎、心包炎、心肌梗死。重型或出血壞死型胰腺炎出現(xiàn)休克高達22％，3.8％死于心功能不全，SAP時的心血管失代償是導致病死率最高的并發(fā)癥。細胞凋亡及凋亡相關(guān)基因是目前生物醫(yī)學領(lǐng)域的研究熱點，在外科多種疾病的發(fā)生和轉(zhuǎn)歸中已受到越來越多的關(guān)注。過去認

2、為在終末分化的成人細胞中如心肌細胞和神經(jīng)元細胞并不發(fā)生細胞凋亡，但是最近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，心肌細胞在缺氧條件下培養(yǎng)以及體外缺血再灌注后的心肌都出現(xiàn)了細胞凋亡；在心肌梗死、快速心室起搏導致的心力衰竭、冠狀動脈栓塞、壓力超載性肥大等動物模型中也出現(xiàn)了病理性細胞凋亡；在末期擴張性心肌病患者的心肌中以及死于心肌梗死患者的心肌梗死區(qū)和梗死邊緣區(qū)都出現(xiàn)了細胞凋亡，細胞凋亡是造成心肌細胞死亡的主要原因；此外在終末期分化的細胞中應用一些試劑誘導時也可以出

3、現(xiàn)細胞凋亡，它包括在傳統(tǒng)上被認為是缺血缺氧造成的細胞壞死。目前關(guān)于SAP時心肌細胞凋亡的研究不多，進一步深入研究顯得十分必要。 DDFA已經(jīng)臨床證實對SAP有明顯的治療效果，但其治療SAP的機理如何，是否通過調(diào)控細胞凋亡對SAP起治療作用，對機體各重要臟器細胞凋亡是否有影響，在什么時間、用什么方式、什么劑量應用影響最大、效果最好，DDFA各藥物間在影響細胞凋亡方面是否有協(xié)同或拮抗作用，進一步調(diào)整該方案、調(diào)整藥物間的劑量組合是否有

4、更好的效果，等等，這些問題都需要進行驗證和探索。本課題擬通過動物實驗解決這些問題中的一部分，以利于臨床DDFA方案的進一步完善，并為此方案臨床推廣應用提供理論依據(jù)。 目的 1、研究正常大鼠心肌細胞凋亡及Bax、Bcl-2基因的表達情況。 2、研究大鼠發(fā)生重癥胰腺炎(SAP)后心肌細胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達的變化，探討細胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達在SAP大鼠心臟損傷中的作用，從而明確SAP心臟損傷

5、的部分機制。 3、研究SAP大鼠應用DDFA治療后心肌細胞凋亡及Bax、Bcl-2基因表達的變化情況，明確DDFA對SAP大鼠心臟損傷的治療作用，探討DDFA對SAP心臟損傷的治療機制，為DDFA方案的臨床應用及推廣提供理論基礎(chǔ)。 材料和方法 1、45只大鼠隨機分成三組：SO組(假手術(shù)組)15只；SAP組15只；DDFA治療組15只。每組再分為6h、12h、18h三個時間點，每個時間點分配5只大鼠。 2、

6、大鼠SAP模型采用5％?；悄懰徕c逆行膽胰管注射法建立；SO組僅行胰膽管穿刺操作，不注射藥物；DDFA組在SAP模型誘發(fā)后，經(jīng)頸靜脈注射DDFA。3、建模后12h時分別處死各組大鼠，肉眼觀察腹腔臟器改變情況，HE染色觀察心肌組織病理變化，全自動生化分析儀測定血cTnI、CK-MB，硫代巴比妥酸反應法測定心肌MDA含量，羥胺法測定心肌SOD含量，TUNEL法測定心肌細胞凋亡，SABC免疫組化染色法測定心肌Bax、Bcl-2基因表達。

7、 結(jié)果 1、SO組心肌未見病理損害，血cTnI、CK-MB正常，心肌MDA和SOD正常，偶見心肌細胞凋亡，Bax和Bcl-2均僅有較弱表達。 2、SAP組心肌組織病理損害較明顯，血cTnI、CK-MB較SO組明顯升高，心肌MDA也明顯升高，而SOD則明顯降低。心肌細胞凋亡指數(shù)顯著高于SO組(P＜0.01)，心肌Bax蛋白表達水平也顯著高于SO組(P＜0.01)，Bcl-2蛋白的表達水平也高于SO組(P＜0.01)，Bcl

8、-2/Bax比值則低于SO組。 3、DDFA組心肌組織病理損害較SAP組減輕，血cTnI、CK-MB下降，心肌MDA亦明顯降低，而SOD則上升。心肌細胞凋亡指數(shù)低于SAP組(P＜0.01)，Bax蛋白表達水平也低于SAP組(P＜0.01)，Bcl-2蛋白的表達水平則高于SAP組(P＜0.05)。Bcl-2/Bax比值也高于SO組。 結(jié)論 1、SAP發(fā)生后，心肌病理形態(tài)受到明顯損害，凋亡細胞明顯增多，AI升高，并隨

9、著時間延長而逐漸增高，AI的變化與cTnI、CK-MB及心肌MDA呈明顯的正相關(guān)，而與心肌SOD呈明顯的負相關(guān)。說明SAP心臟損傷至少部分是通過細胞凋亡機制引起的，而且細胞凋亡是造成心功能進一步惡化的重要因素之一。 2、應用DDFA治療后，心肌病理形態(tài)改善，MDA下降，而SOD上升，凋亡細胞減少，AI明顯下降。說明DDFA對SAP心臟損傷有明顯的治療作用，在SAP早期給予DDFA治療對減輕心臟損害程度、改善預后是有益的。

10、 3、正常心肌Bax和Bcl-2均有較弱表達，總體上兩類基因處于相對平衡狀態(tài)；SAP時Bax和Bcl-2的表達均增強，Bax增強較明顯，Bcl-2增幅相對較小，因此Bcl-2/Bax比值下降，凋亡促進基因與凋亡抑制基因的平衡狀態(tài)受到破壞；應用DDFA治療后，Bax基因表達顯著下調(diào)，而Bcl-2基因表達顯著上調(diào)，Bcl-2/Bax比值上升。說明SAP時心臟細胞凋亡與凋亡相關(guān)基因失衡有關(guān)，DDFA對SAP心肌的保護作用可能部分是通過調(diào)節(jié)凋亡