清胰Ⅱ號對重癥急性胰腺炎大鼠腺泡細胞凋亡的影響及機制探討.pdf

1、目的：
　　通過建立SAP大鼠模型，采用EP干預(yù)，探討HMGB1介導(dǎo)胰腺腺泡細胞凋亡途徑，并予清胰Ⅱ號干預(yù)觀察對胰腺腺泡細胞凋亡的影響，探索其對胰腺保護作用的可能機制。
　　方法：
　　將SD大鼠通過簡單隨機（雌雄不限，200-250g，n=96）分為假手術(shù)組（A組，n=24）、SAP模型組（B組，n=24）、SAP+EP干預(yù)組（C組，n=24只）、SAP+清胰Ⅱ號干預(yù)組(D組，n=24只)。A組大鼠開腹后僅翻動腸管；

2、B組大鼠使用膽胰管逆行注入5％?；悄懰徕c（0.1ml/100g）的方法建立 SAP模型；A、B兩組使用和D組等量的生理鹽水灌胃；C組于制模蘇醒后腹腔注射EP溶液（40mg/kg,6小時一次）；D組大鼠于建模清醒后即用清胰Ⅱ號灌胃（10ml/kg,6小時一次）。將各組按不同時間點(6h、12h、24h)分為3個亞組（每亞組8只）。按時間點(6h、12h、24h)采大鼠靜脈血和取胰腺組織。光鏡觀察胰腺病理變化，并用Schimidt評分標(biāo)準(zhǔn)進

3、行病理評分；ELISA法測血清中HMGB1的濃度；RT-PCR法測胰腺組織Fasl mRNA和Bcl-2 mRNA的相對表達；腺泡細胞的凋亡率使用流式細胞技術(shù)測定；Western Blot檢測胰腺組織中HMGB1、TLR-4和NF-κB蛋白含量。并對各組檢測指標(biāo)作統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　SAP模型組各時間點胰腺炎病理學(xué)評分較假手術(shù)組升高（P<0.05）。與A組比較：B組大鼠血清HMGB1濃度、胰腺組織HMGB1、TLR

4、4、NF-κB蛋白表達均升高（P<0.05），B組6h、12h時間點腺泡細胞的凋亡率及胰腺FasLmRNA表達均升高（P<0.05）。隨著時間延長，B組胰腺病理學(xué)評分、血清HMGB1濃度隨之升高（P<0.05），胰腺腺泡細胞凋亡率逐漸降低（P<0.05），胰腺組織中HMGB1、TLR-4、NF-κB蛋白表達6h到12h升高（P<0.05），12h到24h降低（P<0.05）。與B組比較：C和D組的胰腺炎病理學(xué)評分、血清HMGB1含量、腺

5、泡細胞的凋亡率、胰腺組織Bcl-2mRNA表達量、胰腺組織HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表達水平均降低（P<0.05）；C、D組胰腺組織FasLmRNA、腺泡細胞凋亡率在各對應(yīng)時間點表達量均上升（P<0.05）。C組與D組比較：12h時腺泡細胞凋亡率、6h和24h胰腺組織HMGB1蛋白表達量、12h和24h胰腺組織TLR4蛋白表達較D組高（P<0.05），D組的6h和12h胰腺組織中 NF-κB蛋白表達量和6h胰腺組織中TLR4蛋

6、白表達較C組高（P<0.05）；各時間點胰腺炎病理學(xué)評分、胰腺組織Bcl-2mRNA和FasLmRNA表達、血清HMGB1濃度、6h及24h腺泡細胞的凋亡率、12h胰腺組織HMGB1蛋白表達、24h胰腺組織NF-κB蛋白表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　本實驗條件下，清胰Ⅱ號可增加胰腺腺泡細胞的凋亡，減輕胰腺損傷，其機制可能是通過降低血清中HMGB1濃度，阻礙HMGB1與TLR4結(jié)合，降低NF-κB蛋白