清胰顆粒對重癥急性胰腺炎大鼠腸黏膜屏障的保護(hù)作用.pdf

1、目的：建立大鼠重癥急性胰腺炎模型，并探討中藥清胰顆粒對重癥急性胰腺炎（severe acute pancreatitis，SAP）大鼠腸黏膜屏障功能的影響及其作用機(jī)制方法：選取健康雄性Wistar大鼠分為正常組、假手術(shù)組和模型A、B、C組，采用?；悄懰徕c胰膽管逆行注射方法建立SAP動物模型，假手術(shù)組和模型A、B、C組大鼠膽胰管插管，分別逆行注射生理鹽水和2％、3.5％、5％的?；悄懰徕c，觀察各組死亡率和胰腺損傷程度；在SAP大鼠模型穩(wěn)定

2、后選取150只健康雄性Wistar大鼠，隨機(jī)分為3組，分別為假手術(shù)組、模型組和治療組。模型組和治療組均采用膽胰管逆行注射3.5％?；悄懰徕c建立SAP模型，治療組于造模前2 h、造模后6 h、18 h、30 h和42 h分別給予清胰顆粒灌胃，模型組和假手術(shù)組以同樣的方法分別給與中藥安慰劑和生理鹽水灌胃。各組動物分別于造模前、造模后6h、12 h、24h、48h取腹主動脈血行淀粉酶和二胺氧化酶的檢測，取胰腺組織和末端回腸行HE染色和病理學(xué)評

3、分，同時測量腸絨毛高度、黏膜厚度，并應(yīng)用免疫組化方法檢測小腸黏膜緊密連接蛋白Claudin-1的表達(dá)。 結(jié)果： 1.假手術(shù)組無死亡記錄，模型A、B、C組在術(shù)后72h死亡率分別為20％、50％、70％；模型B組淀粉酶造模后6 h最高達(dá)9023.0±1924.5 U/L，以后隨時間逐漸下降，在72 h降為2245.3±271.6仍高于假手術(shù)組和正常組且有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）；鏡下所見模型B組胰腺間質(zhì)水腫；紅細(xì)胞漏出；炎

4、細(xì)胞浸潤。腺泡細(xì)胞水腫；點(diǎn)片狀出血；灶性變性、壞死；部分導(dǎo)管擴(kuò)張。病理學(xué)評分模型B組與假手術(shù)組各時點(diǎn)比較9.89±2.11 vs1.27±1.13、10.25±1.98 vs1.32±1.28、11.71±2.11 vs1.03±0.11、13.85±1.05 vs1.01±0.19、13.89±0.89 vs0.98±0.07均有顯著性差異。 2.模型組大鼠精神萎靡、豎毛、少動倦臥；治療組大鼠精神狀態(tài)較好、活動較多、排便次數(shù)增

5、加、肛周污染明顯。假手術(shù)組無死亡記錄，治療組SAP大鼠死亡率低。模型和治療組6h、12h、24h、48h的死亡率分別為0％（0/10）、20％（2/10）、40％（4/10）、50％（5/10）和O％（0/10）、20％（2/10）、30％（3/10）、30％（3/10）；治療組24 h死亡率低于模型（p<0.05） 3.假手術(shù)組淀粉酶在造模后6 h一過性升高，隨后恢復(fù)正常；模型組淀粉酶造模后6 h最高，以后隨時間逐漸下降，但在

6、48 h仍高于假手術(shù)組（p<0.05）；與模型比較，治療組造模后12 h降低開始有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05），48 h與假手術(shù)組比較無差異4.假手術(shù)組血清DAO水平在造模前后無變化（p>0.05）；治療組血清DAO水平在造模后24 h和48 h較模型組降低有顯著性差異（p<0.05） 5.假手術(shù)組術(shù)后6h可見胰腺腺泡細(xì)胞輕度水腫、無出血及壞死。模型組可見胰腺間質(zhì)水腫，紅細(xì)胞漏出，炎細(xì)胞浸潤，腺泡細(xì)胞水腫，點(diǎn)片狀出血，灶性變性、壞

7、死，部分胰腺導(dǎo)管擴(kuò)張，隨時間推移胰腺組織病理學(xué)評分逐漸加重。治療組24 h以上改變均減輕病理學(xué)評分降低有統(tǒng)計學(xué)意義。 6.光鏡下假手術(shù)組腸黏膜絨毛結(jié)構(gòu)完整，上皮呈高柱狀，間質(zhì)無水腫、無中性粒細(xì)胞浸潤。模型組腸黏膜結(jié)構(gòu)損傷明顯，并呈進(jìn)行性變化，尤以制模24 h最明顯，可見大鼠回腸間質(zhì)水腫并有點(diǎn)狀出血，血管淋巴管均擴(kuò)張，還可見大量中性粒細(xì)胞浸潤伴淋巴濾泡增生，腸絨毛水腫增粗，高度縮短，頂端上皮有片狀壞死、脫落，杯狀細(xì)胞減少，排列紊亂

8、；黏膜厚度變薄，黏膜腺體排列稀疏，腺體減少；中藥清胰顆粒治療組在造模12h時與模型組相比病理損傷有所減輕，表現(xiàn)為炎癥細(xì)胞浸潤減少，絨毛損傷脫落減少，黏膜厚度及絨毛高度均有改善，造模后24 h開始有顯著的差異。術(shù)后48 h各指標(biāo)均接近正常值7.各組小腸黏膜claudin-1均分布于腸上皮緊密連接的細(xì)胞膜（包括細(xì)胞膜頂部），膜內(nèi)近側(cè)的胞質(zhì)區(qū)少量染色，為棕黃色染色顆粒，胞核及核膜無表達(dá)。假手術(shù)Claudin-1蛋白在細(xì)胞膜表達(dá)且為強(qiáng)陽性；與假

9、手術(shù)組比較，模型組claudin-1表達(dá)明顯下降（p<0.05）；與模型組比較，治療組造模后各時間點(diǎn)Claudin-1表達(dá)升高且有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05） 結(jié)論： 1.應(yīng)用靜脈留置針導(dǎo)管經(jīng)十二指腸乳頭逆行注射3.5％牛磺膽酸鈉（0.1ml/100g體重、注射速度為0.15ml/min）誘導(dǎo)的SAP大鼠動物模型是Aho法制備SAP大鼠模型的改良，是進(jìn)行SAP中藥臨床研究科研較為理想的動物模型2.早期應(yīng)用清胰顆粒能夠改善S