甘露糖對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜免疫屏障的影響.pdf

1、目的:重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是臨床常見的重癥急腹癥，在所有引起死亡的胃腸道及肝臟疾病中排在第14位。胰腺損傷的同時(shí)往往伴有其他臟器功能障礙。大量研究證實(shí)SAP導(dǎo)致腸道粘膜屏障損傷及其介導(dǎo)的病理改變?cè)谄浒l(fā)病過程中起到了關(guān)鍵的作用。腸粘膜屏障中免疫屏障的作用不容忽視，它是機(jī)體整個(gè)免疫系統(tǒng)的重要分支，維持著腸道正常的免疫反應(yīng)。SAP引起腸粘膜免疫屏障損壞將導(dǎo)致腸道免疫功能下降，腸道細(xì)菌及毒

2、素增加，菌群失調(diào)，增加腸道的感染，同時(shí)上皮細(xì)胞更新及修復(fù)減慢，消化及吸收功能受損，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)減少，促進(jìn)疾病的惡化。在腸粘膜通透性增加的前提下，細(xì)菌及內(nèi)毒素引起胰腺的繼發(fā)感染，激發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征（Systemic inflammatory response syndrome，SIRS）、多器官功能障礙綜合癥(Multiple organ dysfunction syndrome，MODS)。因此治療原發(fā)病的同時(shí)對(duì)于腸粘膜屏障的保護(hù)至關(guān)重

3、要。甘露糖是近年來在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)的一種有效抗炎物質(zhì)，具有抗氧化、抗炎癥介質(zhì)和保護(hù)臟器等作用。本研究通過建立重癥急性胰腺炎模型，運(yùn)用甘露糖干預(yù)治療，觀察其對(duì)SAP腸粘膜免疫屏障功能的影響。
　　 方法:1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:60只成年雄性清潔級(jí)SD大鼠，隨機(jī)分為假手術(shù)(A)組、胰腺炎模型(B)組和甘露糖治療(C)組，每個(gè)組又分為6小時(shí)和12小時(shí)兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，共6組每組10只大鼠。經(jīng)十二指腸胰膽管穿刺逆行注射5％?；悄懰徕c誘導(dǎo)SAP大鼠

4、模型，治療組在建立模型后立即經(jīng)尾靜脈注射0.3g/kg甘露糖，假手術(shù)組僅于開腹翻動(dòng)十二指腸后縫合腹壁。完成后均在6h、12h，取血、胰腺、腸組織及腸粘液。
　　 2、實(shí)驗(yàn)方法:光學(xué)顯微鏡觀察各組胰腺及腸組織病理切片，ELISA方法檢測(cè)血清中甘露糖結(jié)合凝集素(Mannose binding lectin，MBL)及腸道組織勻漿中白介素4(interleukin-4，IL-4)的含量，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)分離的腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的改變，

5、免疫組織化學(xué)方法標(biāo)記腸粘膜固有層T淋巴細(xì)胞的表達(dá)，放射免疫法檢測(cè)腸粘液中分泌性免疫球蛋白(secretory immunoglobulin A，slgA)的含量。
　　 3、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。每組數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)及正態(tài)性檢驗(yàn)，而后應(yīng)用適合的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，設(shè)α=0.05，P＞0.05為差別不顯著，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05為差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　

6、 結(jié)果:1、胰腺組織病理學(xué)改變:假手術(shù)組(A6，A12):胰腺組織結(jié)構(gòu)完整，腺泡小葉及腺體清晰可見，無出血及壞死，6、12兩時(shí)間點(diǎn)無差別。模型組(B6，B12):胰腺小葉間高度水腫，腺泡細(xì)胞空泡變嚴(yán)重，小葉內(nèi)炎細(xì)胞廣泛浸潤(rùn)，并看可見片狀壞死和出血，12小時(shí)比6小時(shí)，以上情況更加多見。治療組(C6，C12):亦呈較明顯的炎癥變化，胰腺出血壞死較模型組輕度減輕，兩時(shí)間點(diǎn)之間無明顯差異。
　　 2、腸道組織病理學(xué)改變:假手術(shù)組(A6，

7、B6):腸粘膜絨毛排列整齊，上皮細(xì)胞層完整，刷狀緣光滑，附有薄層粘液，未見明顯的炎癥表現(xiàn)。組內(nèi)兩時(shí)間點(diǎn)無差別。模型組(A6，A12):腸粘膜上皮細(xì)胞變性、壞死，部分脫落以至固有層裸露，絨毛排列紊亂及脫落，固有層大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，12小時(shí)比6小時(shí)，以上情況更加多見。治療組(C6，C12):腸粘膜炎癥損傷程度較模型組減輕，兩時(shí)間點(diǎn)之間無明顯差異。
　　 3、血清MBL:與假手術(shù)組同時(shí)間點(diǎn)比較，模型組和治療組血清

8、MBL含量均顯著升高（P＜0.05）;與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，治療組血清MBL含量顯著增高(P＜0.05);治療組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)比較，12小時(shí)比6小時(shí)明顯增加(P＜0.05);假手術(shù)組、模型組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)相互比較未見明顯差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 4、腸粘液sIgA:與假手術(shù)組同時(shí)間點(diǎn)比較，模型組和治療組腸粘液sIgA含量均顯著減少(P＜0.05);與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，治療組明顯增高(P＜0.05);假手術(shù)組、模型

9、組、治療組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)相互比較未見顯著差異(P＞0.05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、腸道組織勻漿IL-4:與假手術(shù)組同時(shí)間點(diǎn)比較，模型組和治療組腸道組織IL-4含量均顯著減少(P＜0.05);與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，治療組6小時(shí)未見顯著差異，12小時(shí)腸道組織IL-4含量顯著升高(P＜0.05)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。假手術(shù)組、模型組、治療組不同時(shí)間點(diǎn)相互比較未見顯著差異(P＞0.05），相互之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 6、腸粘膜

10、上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(intestinal epithelial lymphocyte，IEL):與假手術(shù)組同時(shí)間點(diǎn)比較，模型組和治療組腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞CD3淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞的表達(dá)顯著減少(P＜0.05);CD8淋巴細(xì)胞沒有變化;與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，治療組CD3淋巴細(xì)胞、CD4淋巴細(xì)胞的表達(dá)顯著增加(P＜0.05)，CD8淋巴細(xì)胞沒有變化;假手術(shù)組、模型組、治療組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)相互比較未見顯著差異（P＞0.05），相互之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

11、。
　　 7、腸粘膜固有層T淋巴細(xì)胞（lamina propria lymphocyte，LPL）:與假手術(shù)組同時(shí)間點(diǎn)比較，模型組和治療組6小時(shí)腸粘膜固有層CD4、CD8T淋巴細(xì)胞表達(dá)沒有明顯變化，12小時(shí)明顯下降(P＜0.05);與模型組同時(shí)間點(diǎn)比較，治療組6小時(shí)沒有變化，12小時(shí)腸道組織CD4、CD8淋巴細(xì)胞顯著升高(P＜0.05);模型組不同時(shí)間點(diǎn)比較，12小時(shí)CD4、CD8T淋巴細(xì)胞較6小時(shí)減少，治療組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)相互比

12、較，12小時(shí)CD4、CD8T淋巴細(xì)胞較6小時(shí)減少（P＜0.05），假手術(shù)組不同時(shí)間點(diǎn)比較，未見顯著差異(P＞0.05)，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:1、重癥急性胰腺炎造成胰腺損傷的同時(shí)破壞腸道粘膜免疫屏障，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)損傷加重。其表現(xiàn)sIgA減少，腸粘膜上皮內(nèi)及固有層T淋巴細(xì)胞亞群數(shù)目減少，局部抗炎因子IL-4減少。
　　 2、甘露糖對(duì)重癥急性胰腺炎大鼠腸粘膜免疫屏障具有保護(hù)作用。
　　 3、甘露糖能上調(diào)MBL