甘露糖對重癥急性胰腺炎大鼠相關(guān)肺損傷的干預作用.pdf

1、目的:重癥急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)是臨床上常見的急腹癥之一，其并發(fā)癥多，病死率高，預后兇險。急性肺損傷(Acute lung injury，ALI)和急性呼吸窘迫綜合征(Acute resprintery distress syndrome，ARDS)是SAP最常見最嚴重的并發(fā)癥，是SAP死亡的最主要原因。重癥急性胰腺炎常誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)綜合征(systemic inflammatory

2、response syndrome，SIRS)，大量前炎癥趨化因子及細胞因子釋放，造成多器官功能衰竭(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)。肺部最先受累，循環(huán)中的大量炎癥介質(zhì)進入肺組織，激活肺巨噬細胞，釋放大量細胞因子如TNF-α、IL-8、IL-1、IL-6等，引起PMN的趨化和活化，造成肺組織損傷。
　　 甘露糖受體(mannose receptor，MR)作為模式識別受體，在肺

3、泡巨噬細胞上高表達。肺泡巨噬細胞上的甘露糖受體可識別和結(jié)合許多病原生物，如白色念珠菌、杜氏利什曼原蟲、結(jié)核分枝桿菌、卸Ⅳ、卡氏肺孢子菌等[1-5]，在維持機體內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，調(diào)節(jié)肺組織過強炎性反應(yīng)方面起著重要作用。
　　 目前對急性胰腺炎相關(guān)ALI仍沒有有效而低副作用的藥物。隨著糖生物學的發(fā)展，某些糖類的抗炎作用已逐漸被認識。國外己有KossiJ等[6，7]發(fā)現(xiàn)甘露糖能減輕傷口愈合時的炎癥反應(yīng)，抑制中性粒細胞的氧化爆發(fā)，同時抑制疤痕

4、肉芽組織的生長，甘露糖的衍生物對腹膜炎，佐劑性關(guān)節(jié)炎有抗炎作用。甘露糖是否通過與巨噬細胞的MR作用，影響巨噬細胞釋放炎癥介質(zhì)，抑制PMN的趨化和激活，減輕肺部炎癥。為此，本研究通過建立大鼠AP相關(guān)ALI模型，并給予甘露糖干預，觀察胰腺、肺組織的病理改變，肺組織的濕/干重比率，肺組織TNF-α水平，肺組織甘露糖受體(MR)蛋白及mRNA的表達情況，探討甘露糖對于實驗性重癥急性胰腺炎大鼠肺損傷的干預作用機制。
　　 方法:將60只健

5、康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，體重250-300g，隨機分為三個組:實驗對照組(sham operation group，SO組)、重癥急性胰腺炎肺損傷組(SAP組)、甘露糖干預組(MT組)，每組又分為6h、12h兩個亞組，每亞組共10只老鼠。模型組用10％水合氯醛(3.0ml/kg)腹腔注射麻醉，無菌操作下行腹正中切口，將十二指腸提出，顯露胰膽管，以小動脈夾夾住近肝門處肝總管，用4號加工鈍頭注射器針頭于十二指腸乳頭附近逆

6、行插入胰膽管，以0.1ml/min速度注入5％?；悄懰徕c(1.0ml/kg)，注畢拔出針頭，捏閉胰膽管入十二指腸處，觀察5min，去除小動脈夾，誘導AP模型，逐層關(guān)腹。SO組剖腹后只翻動胰腺及十二指腸，不注射藥物。甘露糖治療組于造模后立即經(jīng)尾靜脈注射10％甘露糖(300mg/kg)。各組在制模后6h、12h兩時間點處死大鼠。取胰腺和右肺上葉肺組織甲醛固定。測定肺濕/干重比值(W/D)、采用ELISA法檢測肺組織TNF-α、RT-PCR檢

7、測肺組織MRmRNA表達、免疫組織化學法檢測肺組織MR蛋白的表達。將所得實驗數(shù)據(jù)通過SPSS15.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、胰腺組織的病理變化:光鏡下，SO組胰腺組織結(jié)構(gòu)大致正常;SAP組大鼠腺小葉間隔增大，腺小葉結(jié)構(gòu)松散、紊亂，間質(zhì)內(nèi)可見大量炎細胞浸潤，淡紅色水腫液增多，并可見胰腺片狀壞死，壞死區(qū)內(nèi)腺泡結(jié)構(gòu)消失，腺泡細胞萎縮、核溶解消失。隨著時間的推移，上述病變程度加深，壞死面積逐漸擴大，腹水

8、量也增多。而MT組病理改變較SAP組相對較輕。(Fig1)
　　 2、肺組織的病理變化:光鏡下，SO組肺組織結(jié)構(gòu)大致正常;SAP組肺間質(zhì)腫脹，肺泡間隔增寬，毛細血管擴張充血，大量炎性細胞浸潤，部分肺泡腔萎陷不張。隨著時間的推移，上述病變程度加深。而MT組病理改變較SAP組相對較輕。(Fig2)
　　 3、肺組織濕/干重比率:SO組肺組織濕/干重比率在不同時間點無明顯變化，與SO組比較，SAP組在各時點均明顯升高(P＜0.

9、05），與AP組比較，MT組在各時間點肺組織濕/干重比率明顯降低(P＜0.05)。(Table1)
　　 4、肺組織TNF-α表達:SO組肺組織TNF-α水平在不同時間點無明顯變化，與SO組比較，AP組在各時點均明顯升高(P＜0.05)，與SAP組比較，MT組在各時間點肺組織TNF-α水平明顯降低(P＜0.05）。(Table2)
　　 5、肺組織甘露糖受體(MR)的表達:SO組肺組織MRmRNA及蛋白的表達在不同時間點